產(chǎn)品概述
本試劑盒采用染料法熒光定量PCR技術(shù)，專用于檢測(cè)人附紅細(xì)胞體（人嗜血支原體）的DNA。試劑盒包含優(yōu)化的預(yù)混液、引物及配套試劑，具有高靈敏度和特異性，適用于科研領(lǐng)域的定性或定量分析。
產(chǎn)品名稱 | 人附紅細(xì)胞體（人嗜血支原體）染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Human Hemoplasma (Haemophilus支原體) Dye-based qPCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測(cè)類型 | PCR檢測(cè) | 產(chǎn)品貨號(hào) | PR3092 |
產(chǎn)品組成
2×染料法qPCR預(yù)混液（含熒光染料，適配No/Low/High Rox機(jī)型）
熒光PCR專用模板稀釋液
無菌超純水
人附紅細(xì)胞體特異性引物干粉（50次反應(yīng)）
陽性對(duì)照（1×10^7 拷貝/μL）
使用手冊(cè)
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
自備材料：樣品DNA模板、RNase-free離心管/八連排、移液器、離心機(jī)、冰盒、qPCR儀。
試劑處理：
預(yù)混液及引物干粉需-20℃保存，使用前置于冰上緩慢解凍，避免反復(fù)凍融。
引物干粉需短暫離心后加入165 μL超純水復(fù)溶，混勻后分裝保存。
反應(yīng)體系配置（20 μL/反應(yīng)）
| 成分 | 體積（μL） |
| 2×預(yù)混液 | 10 |
| 正向引物（10 μM） | 0.8 |
| 反向引物（10 μM） | 0.8 |
| 模板DNA | 2-5 |
| 超純水 | 補(bǔ)足至20 |
注意事項(xiàng)：
建議設(shè)置3次技術(shù)重復(fù)及陰性對(duì)照（NTC）。
若需定量分析，需用陽性對(duì)照梯度稀釋繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（Ct-log濃度）。
擴(kuò)增程序
預(yù)變性：95℃ 3分鐘
循環(huán)階段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號(hào)）
結(jié)果判讀
定性檢測(cè)：
陽性：Ct≤35，且擴(kuò)增曲線呈典型S型。
陰性：Ct≥40。
可疑（35<Ct<40）：需重復(fù)檢測(cè)。
定量檢測(cè)：通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算模板濃度。
運(yùn)輸與保存
低溫運(yùn)輸，-20℃避光保存，有效期12個(gè)月。
注意事項(xiàng)
操作全程需避免核酸污染，建議在超凈臺(tái)中進(jìn)行。
反應(yīng)體系配置需在冰上完成，減少酶活性損失。
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)需符合MIQE準(zhǔn)則，確?？芍貜?fù)性。
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關(guān)鍵字： 人附紅細(xì)胞體（人嗜血支原體）;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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