耳念珠菌染料法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 耳念珠菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Candida auris Dye-based qPCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR3216 |
產(chǎn)品用途
科研用途，適用于耳念珠菌（Candida auris）的定性及定量檢測，檢測下限為1.0 ng/μL。
技術原理
基于熒光定量PCR技術，通過特異性引物和熒光染料對靶標DNA進行擴增與實時檢測，結(jié)合標準曲線實現(xiàn)定量分析。
試劑盒組成
預混反應液：含Taq DNA聚合酶、dNTPs、Mg2?緩沖液及熒光染料。
陽性對照：無傳染性DNA片段（1×10?拷貝/μL）。
模板稀釋液：用于標準品梯度稀釋。
陰性對照：無DNA模板的緩沖液。
實驗步驟
標準曲線制備（以102~10?拷貝/μL為例）
標記離心管：編號7至2，分別對應10?~102拷貝/μL梯度。
稀釋陽性對照：
7號管：加入45 μL稀釋液 + 5 μL陽性對照（1×10?拷貝/μL），震蕩混勻，得10?拷貝/μL。
依次梯度稀釋至2號管（102拷貝/μL），每步更換槍頭。
保存：稀釋后標準品置于冰上備用。
PCR反應體系配制
每20 μL反應體系：
預混液10 μL
引物探針混合液2 μL
模板DNA 2 μL
ddH?O補至20 μL。
上機檢測
設置PCR程序：
預變性：95℃ 5分鐘
循環(huán)階段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 1分鐘（采集熒光信號）。
數(shù)據(jù)分析：根據(jù)標準曲線計算樣品中耳念珠菌DNA濃度。
注意事項
防污染：操作需在獨立潔凈區(qū)域進行，使用帶濾芯槍頭。
標準品處理：避免反復凍融，稀釋后盡快使用。
適用范圍：僅限科研，不可用于臨床診斷。
性能參數(shù)
靈敏度：檢測下限0.1%（混合樣品）或1.0 ng/μL（純DNA）。
線性范圍：102~10?拷貝/μL（R2≥0.99）。
特異性：不與常見病原體DNA發(fā)生交叉反應。
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關鍵字： 耳念珠菌;染料法熒光定量;RT-PCR試劑盒;
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