產(chǎn)品概述
本試劑盒采用染料法熒光定量PCR技術(shù)，專用于檢測(cè)巴西果仁（Bertholletia excelsa）源性成分，適用于食品、藥品及環(huán)境樣本的物種特異性鑒定。試劑盒包含預(yù)混優(yōu)化引物探針、陽(yáng)性對(duì)照及反應(yīng)體系，具有高靈敏度和特異性，可有效區(qū)分巴西果仁與其他植物或微生物DNA。
產(chǎn)品名稱 | 巴西果仁源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Brazil Nut-derived Component Dye-based qPCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測(cè)類型 | PCR檢測(cè) | 產(chǎn)品貨號(hào) | PR3168 |
產(chǎn)品組成
PCR預(yù)混液：含Taq DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液及熒光染料（如SYBR Green）。
陽(yáng)性對(duì)照：巴西果仁特異性DNA片段（凍干粉或溶液，濃度1×10^8拷貝/μL）。
模板稀釋液：用于標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋。
陰性對(duì)照：無(wú)DNA模板的滅菌水。
操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋（示例：10^2–10^7拷貝/μL梯度）
標(biāo)記離心管：編號(hào)7至2號(hào)管，分別對(duì)應(yīng)10^7至10^2拷貝/μL濃度梯度。
稀釋液添加：每管加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液。
梯度稀釋：
7號(hào)管：加入5 μL陽(yáng)性原液（1×10^8拷貝/μL），震蕩混勻，得10^7拷貝/μL。
依次轉(zhuǎn)移5 μL至下一濃度管，重復(fù)混勻步驟，直至2號(hào)管（10^2拷貝/μL）。
注意：每次稀釋需更換槍頭，避免交叉污染。
PCR反應(yīng)體系配制
反應(yīng)液配制：按以下比例混合（以50 μL體系為例）：
預(yù)混液25 μL
引物探針混合液5 μL
模板DNA 10 μL
補(bǔ)足滅菌水至50 μL。
加樣：將混合液分裝至PCR管，分別加入待測(cè)樣本、陽(yáng)性對(duì)照及陰性對(duì)照。
熒光定量PCR程序
預(yù)變性：95℃ 5分鐘。
擴(kuò)增循環(huán)（40輪）：
變性：95℃ 15秒
退火/延伸：60℃ 1分鐘（采集熒光信號(hào)）。
結(jié)果判讀
標(biāo)準(zhǔn)曲線：以陽(yáng)性對(duì)照Ct值繪制對(duì)數(shù)濃度曲線，計(jì)算樣本拷貝數(shù)。
特異性驗(yàn)證：僅巴西果仁DNA應(yīng)顯示擴(kuò)增曲線，陰性對(duì)照無(wú)信號(hào)。
注意事項(xiàng)
保存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
污染防控：標(biāo)準(zhǔn)品稀釋與樣本處理需分區(qū)操作。
適用性：本試劑盒僅供科研使用，不適用于臨床診斷。
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關(guān)鍵字： 巴西果仁源性成分;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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