產品概述
本試劑盒用于牛赤羽病毒（Bovine Akabane Virus）RNA的熒光定量RT-PCR檢測，具有高靈敏度、特異性及穩(wěn)定性。采用熒光探針法，可實現(xiàn)病毒核酸的絕對定量分析，適用于臨床樣本、動物組織及環(huán)境樣本的快速篩查。
產品名稱 | 牛赤羽病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 英文名稱 | Akabane Virus Dye-based qRT-PCR Kit |
產品規(guī)格 | 50T | 產品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產品貨號 | PR3350 |
檢測原理
RT-PCR技術：通過逆轉錄酶將病毒RNA逆轉錄為cDNA，再經Taq DNA聚合酶擴增目標片段。
熒光信號檢測：反應體系中包含特異性引物、探針及熒光染料，擴增過程中熒光信號與產物量成正比，通過標準曲線計算病毒拷貝數(shù)。
試劑盒組成
核心組分：
RT-PCR預混液（含逆轉錄酶、Taq酶、dNTPs、Mg2?）
牛赤羽病毒特異性引物及探針
陽性對照（滅活病毒RNA）
陰性對照（DEPC水）
標準品梯度（101~10? copies/μL）
輔助試劑：
核酸提取液（溶液A、B）
稀釋液（C）
溶解液（tD）
操作步驟
1. 樣本前處理
固體樣本：取1-5 mg組織，加入100 μL溶液A工作液，95℃裂解10分鐘，冷卻后加入10 μL溶液B混勻，離心取上清。
液體樣本：直接取5 μL加入裂解液，同法處理。
2. PCR反應體系配制（40 μL體系）
| 成分 | 體積（μL） |
| RT-PCR預混液 | 20 |
| 引物探針混合液 | 2 |
| 模板DNA（上清液） | 5 |
| DEPC水 | 補足至40 |
3. 擴增程序
逆轉錄：50℃ 15分鐘
預變性：95℃ 3分鐘
擴增循環(huán)（45次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（熒光采集）
結果判讀
標準曲線：以標準品Ct值為縱坐標、拷貝數(shù)對數(shù)為橫坐標繪制曲線，計算樣本病毒載量。
閾值設定：Ct值≤35且擴增曲線呈S型判為陽性。
注意事項
實驗環(huán)境：嚴格分區(qū)操作（試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴增區(qū)），避免交叉污染。
質量控制：每批次實驗需包含陽性對照（Ct值應在預期范圍內）及陰性對照（無擴增）。
儀器要求：需使用熒光定量PCR儀，支持FAM通道檢測。
儲存與有效期
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。
有效期：12個月。
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關鍵字： 牛赤羽病毒;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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