滑液支原體染料法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 滑液支原體染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Mycoplasma synoviae Dye-based qPCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR3445 |
產(chǎn)品概述
本試劑盒基于熒光定量PCR技術(shù)，針對(duì)滑液支原體（Mycoplasma hyosynoviae）特異性核酸序列設(shè)計(jì)引物和探針，通過染料法檢測體系實(shí)現(xiàn)對(duì)病原體DNA的定性或定量分析，適用于臨床樣本、培養(yǎng)物或環(huán)境樣本的快速檢測。
試劑組成
反應(yīng)液：含熒光染料預(yù)混液（如SYBR Green）、dNTPs、緩沖體系等（500μL×2管）。
酶液：熱啟動(dòng)Taq DNA聚合酶（50μL×1管）。
陽性質(zhì)控品：滑液支原體特異性DNA片段（50μL×1管）。
陰性質(zhì)控品：無核酸酶水（250μL×1管）。
注：不同批號(hào)組分不可混用，避免反復(fù)凍融（建議≤5次）。
儲(chǔ)存與運(yùn)輸
儲(chǔ)存條件：-20℃±5℃避光保存，有效期12個(gè)月。
運(yùn)輸要求：低溫避光運(yùn)輸，避免反復(fù)凍融。
適用儀器
支持主流熒光定量PCR儀，包括但不限于：
ABI 7500
安捷倫 MX3000P/3005P
Bio-Rad CFX系列
Roche LightCycler
樣本處理
樣本類型：細(xì)胞培養(yǎng)上清、血清、關(guān)節(jié)液等體液。
DNA提取：
使用商業(yè)核酸提取試劑盒或酚-氯仿法提取樣本DNA。
提取后DNA建議保存于-70℃，避免反復(fù)凍融（≤3次）。
操作步驟
1. 試劑準(zhǔn)備
解凍：所有試劑置于冰上緩慢融化，輕彈混勻后短暫離心（1000 rpm，10秒）。
反應(yīng)體系配置（以20μL為例）：
反應(yīng)液 10μL
酶液 0.5μL
模板DNA 2μL
無核酸酶水補(bǔ)至20μL
2. PCR擴(kuò)增程序
| 步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
| 預(yù)變性 | 95℃ | 3 min | 1 |
| 變性 | 95℃ | 15 sec | 40 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 30 sec | |
3. 數(shù)據(jù)分析
定性判定：Ct值≤35且擴(kuò)增曲線呈“S”形判為陽性。
定量分析：以陽性質(zhì)控品標(biāo)準(zhǔn)曲線（log濃度 vs Ct值）計(jì)算待測樣本濃度。
注意事項(xiàng)
分區(qū)操作：樣本處理、試劑配制、擴(kuò)增需在不同區(qū)域進(jìn)行，避免交叉污染。
質(zhì)控要求：每批次實(shí)驗(yàn)需包含陰/陽性質(zhì)控。
污染控制：實(shí)驗(yàn)后使用10%次氯酸或75%乙醇清潔臺(tái)面及移液器。
避光保存：反應(yīng)液需避光，避免熒光淬滅。
局限性
檢測結(jié)果需結(jié)合臨床指征及其他實(shí)驗(yàn)室檢查綜合判斷。
極低濃度樣本（Ct值>35）建議重復(fù)檢測確認(rèn)。
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關(guān)鍵字： 滑液支原體;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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