肺炎支原體染料法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 肺炎支原體染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Mycoplasma pneumoniae Dye-based qPCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR3446 |
檢驗原理
本試劑盒基于熒光定量PCR技術(shù)（染料法或探針法），通過特異性引物和熒光探針/染料對肺炎支原體（MP）核酸進行體外擴增檢測。染料法通過雙鏈DNA結(jié)合染料（如SYBR Green）實時監(jiān)測擴增產(chǎn)物，探針法則采用TaqMan探針實現(xiàn)靶序列特異性檢測。靈敏度可達100拷貝/反應(yīng)，特異性強，避免與其他病原體交叉反應(yīng)。
試劑組成
反應(yīng)液：含PCR緩沖體系、dNTPs等（500μL×2管）。
酶液：熱啟動Taq DNA聚合酶（50μL×1管）。
陽性質(zhì)控品：肺炎支原體標準核酸（50μL×1管）。
陰性質(zhì)控品：無核酸酶水（250μL×1管）。
規(guī)格：50T/盒（20μL體系/反應(yīng)）。
儲存與運輸
保存條件：-20℃±5℃避光保存，避免反復凍融（≤5次）。
有效期：12個月。
運輸：低溫干冰或冰袋運輸。
適用儀器
兼容主流熒光定量PCR儀，包括：
ABI 7500
安捷倫 MX3000P/3005P
LightCycler（Roche）
Bio-Rad CFX系列
Eppendorf Mastercycler ep realplex
樣本要求
采集類型：咽拭子（專用采樣拭子，避免觸及舌部）。
處理：立即置于無菌采集管中密封，-80℃保存（長期）或4℃暫存（24小時內(nèi)檢測）。
DNA提?。盒枳詡渖虡I(yè)化核酸提取試劑盒。
操作流程
樣本制備：提取樣本DNA，建議濃度≥10 ng/μL。
反應(yīng)體系配制：按比例混合反應(yīng)液、酶液及模板DNA。
PCR擴增：
預變性：95℃ 5分鐘；
循環(huán)參數(shù)：95℃ 15秒 → 60℃ 45秒（40循環(huán)，熒光采集）。
結(jié)果判讀：
定性：Ct值≤38且擴增曲線呈S型為陽性；
定量：需標準曲線（線性范圍≥5個數(shù)量級）。
質(zhì)量控制
每批次檢測需包含陰/陽性質(zhì)控：
陽性對照：Ct值應(yīng)在預期范圍內(nèi)；
陰性對照：無擴增信號（Ct值≥40或無曲線）。
注意事項
不同批號組分不可混用；
避免試劑反復凍融，分裝保存；
實驗環(huán)境需分區(qū)（試劑準備、樣本處理、擴增區(qū)），防止污染；
臨床診斷需經(jīng)國家藥監(jiān)局批準，科研用途需明確標注。
性能參數(shù)
靈敏度：100拷貝/反應(yīng)（染料法）；20 copies/μL（LAMP法，可選）。
特異性：不與肺炎衣原體等常見呼吸道病原體交叉反應(yīng)。
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