產品概述

本試劑盒采用熒光染料法（SYBR Green I或其他等效染料）進行等孢球蟲DNA的定量PCR檢測，適用于臨床樣本、環(huán)境樣本或實驗研究中的等孢球蟲特異性核酸定量分析。試劑盒包含預混反應體系，操作簡便，靈敏度高，可檢測低至單拷貝的靶標DNA。

檢測原理

熒光染料特性：

游離染料的吸收峰為471 nm，與DNA結合后吸收峰偏移至500 nm，發(fā)射峰為530 nm。

熒光信號強度與擴增產物量成正比，通過Ct值定量目標DNA濃度。

標準曲線法：

以陽性對照濃度的對數(shù)（log值）為橫坐標，Ct值為縱坐標繪制標準曲線。

待測樣本的Ct值通過標準曲線換算為DNA濃度。

試劑盒組成

預混反應液：含DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液及優(yōu)化濃度的熒光染料。

陽性對照：已知濃度的等孢球蟲標準DNA。

陰性對照：無核酸酶水。

其他組分：必要時包含內參引物或校準品。

操作步驟

樣本處理：提取待測樣本DNA，建議使用柱提法或磁珠法。

反應體系配制（以20 μL為例）：

預混液10 μL + 引物混合液2 μL + 模板DNA 2 μL + 無核酸酶水補至20 μL。

擴增程序（需根據(jù)儀器調整）：

預變性：95℃ 3分鐘；

循環(huán)階段：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號），共40個循環(huán)。

數(shù)據(jù)分析：

儀器軟件自動生成擴增曲線和Ct值，通過標準曲線計算樣本濃度。

性能參數(shù)

靈敏度：可檢測低至10拷貝/μL的靶標DNA。

特異性：引物設計針對等孢球蟲保守序列，避免交叉反應。

重復性：批內和批間變異系數(shù)（CV）≤5%。

注意事項

避免反復凍融試劑，解凍后需渦旋混勻。

操作時需佩戴手套，防止核酸污染。

熒光信號采集需避光，建議使用光學蓋膜密封反應板。

儲存與有效期

保存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。

有效期：12個月（見包裝標簽）。

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