產(chǎn)品概述
本試劑盒采用熒光染料法（SYBR Green I或其他等效染料）進(jìn)行等孢球蟲(chóng)DNA的定量PCR檢測(cè)，適用于臨床樣本、環(huán)境樣本或?qū)嶒?yàn)研究中的等孢球蟲(chóng)特異性核酸定量分析。試劑盒包含預(yù)混反應(yīng)體系，操作簡(jiǎn)便，靈敏度高，可檢測(cè)低至單拷貝的靶標(biāo)DNA。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 等孢球蟲(chóng)通用染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱(chēng) | Isospora spp. Universal Dye-based qPCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類(lèi) | 熒光定量PCR |
檢測(cè)類(lèi)型 | PCR檢測(cè) | 產(chǎn)品貨號(hào) | PR3493 |
檢測(cè)原理
熒光染料特性：
游離染料的吸收峰為471 nm，與DNA結(jié)合后吸收峰偏移至500 nm，發(fā)射峰為530 nm。
熒光信號(hào)強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物量成正比，通過(guò)Ct值定量目標(biāo)DNA濃度。
標(biāo)準(zhǔn)曲線法：
以陽(yáng)性對(duì)照濃度的對(duì)數(shù)（log值）為橫坐標(biāo)，Ct值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
待測(cè)樣本的Ct值通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線換算為DNA濃度。
試劑盒組成
預(yù)混反應(yīng)液：含DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液及優(yōu)化濃度的熒光染料。
陽(yáng)性對(duì)照：已知濃度的等孢球蟲(chóng)標(biāo)準(zhǔn)DNA。
陰性對(duì)照：無(wú)核酸酶水。
其他組分：必要時(shí)包含內(nèi)參引物或校準(zhǔn)品。
操作步驟
樣本處理：提取待測(cè)樣本DNA，建議使用柱提法或磁珠法。
反應(yīng)體系配制（以20 μL為例）：
預(yù)混液10 μL + 引物混合液2 μL + 模板DNA 2 μL + 無(wú)核酸酶水補(bǔ)至20 μL。
擴(kuò)增程序（需根據(jù)儀器調(diào)整）：
預(yù)變性：95℃ 3分鐘；
循環(huán)階段：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號(hào)），共40個(gè)循環(huán)。
數(shù)據(jù)分析：
儀器軟件自動(dòng)生成擴(kuò)增曲線和Ct值，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度。
性能參數(shù)
靈敏度：可檢測(cè)低至10拷貝/μL的靶標(biāo)DNA。
特異性：引物設(shè)計(jì)針對(duì)等孢球蟲(chóng)保守序列，避免交叉反應(yīng)。
重復(fù)性：批內(nèi)和批間變異系數(shù)（CV）≤5%。
注意事項(xiàng)
避免反復(fù)凍融試劑，解凍后需渦旋混勻。
操作時(shí)需佩戴手套，防止核酸污染。
熒光信號(hào)采集需避光，建議使用光學(xué)蓋膜密封反應(yīng)板。
儲(chǔ)存與有效期
保存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
有效期：12個(gè)月（見(jiàn)包裝標(biāo)簽）。
公司正在出售的產(chǎn)品
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關(guān)鍵字： 等孢球蟲(chóng)通用;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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