產品概述

本試劑盒采用熒光染料法(SYBR Green I或其他等效染料)進行等孢球蟲DNA的定量PCR檢測,適用于臨床樣本、環(huán)境樣本或實驗研究中的等孢球蟲特異性核酸定量分析。試劑盒包含預混反應體系,操作簡便,靈敏度高,可檢測低至單拷貝的靶標DNA。
產品名稱 | 等孢球蟲通用染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Isospora spp. Universal Dye-based qPCR Kit |
產品規(guī)格 | 50T | 產品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產品貨號 | PR3493 |

檢測原理

熒光染料特性:
游離染料的吸收峰為471 nm,與DNA結合后吸收峰偏移至500 nm,發(fā)射峰為530 nm。
熒光信號強度與擴增產物量成正比,通過Ct值定量目標DNA濃度。
標準曲線法:
以陽性對照濃度的對數(shù)(log值)為橫坐標,Ct值為縱坐標繪制標準曲線。
待測樣本的Ct值通過標準曲線換算為DNA濃度。
試劑盒組成

預混反應液:含DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液及優(yōu)化濃度的熒光染料。
陽性對照:已知濃度的等孢球蟲標準DNA。
陰性對照:無核酸酶水。
其他組分:必要時包含內參引物或校準品。
操作步驟

樣本處理:提取待測樣本DNA,建議使用柱提法或磁珠法。
反應體系配制(以20 μL為例):
預混液10 μL + 引物混合液2 μL + 模板DNA 2 μL + 無核酸酶水補至20 μL。
擴增程序(需根據(jù)儀器調整):
預變性:95℃ 3分鐘;
循環(huán)階段:95℃ 15秒 → 60℃ 30秒(采集熒光信號),共40個循環(huán)。
數(shù)據(jù)分析:
儀器軟件自動生成擴增曲線和Ct值,通過標準曲線計算樣本濃度。
性能參數(shù)

靈敏度:可檢測低至10拷貝/μL的靶標DNA。
特異性:引物設計針對等孢球蟲保守序列,避免交叉反應。
重復性:批內和批間變異系數(shù)(CV)≤5%。
注意事項

避免反復凍融試劑,解凍后需渦旋混勻。
操作時需佩戴手套,防止核酸污染。
熒光信號采集需避光,建議使用光學蓋膜密封反應板。
儲存與有效期
保存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
有效期:12個月(見包裝標簽)。
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關鍵字: 等孢球蟲通用;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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