腸出血性大腸桿菌O104:H4血清型染料法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 腸出血性大腸桿菌O104:H4血清型染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Enterohemorrhagic Escherichia coli O104:H4 Serotype Dye-based qPCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR3618 |
產(chǎn)品概述
本試劑盒采用染料法熒光定量PCR技術(shù)（如SYBR Green I），通過特異性引物擴(kuò)增腸出血性大腸桿菌O104:H4血清型的保守基因序列（如志賀毒素基因或緊密黏附素基因）。染料與雙鏈DNA結(jié)合后釋放熒光信號，通過實時監(jiān)測熒光強度實現(xiàn)定性與定量分析，適用于糞便、食品樣本及環(huán)境拭子等檢測。
核心特點
高特異性：引物針對O104:H4血清型設(shè)計，與其他大腸桿菌（如O157:H7）無交叉反應(yīng)。
高靈敏度：檢測限低至幾百拷貝/反應(yīng)。
操作便捷：預(yù)混反應(yīng)液（2×qPCR MagicMix），即開即用。
防污染設(shè)計：一管式閉管操作，減少氣溶膠污染風(fēng)險。
試劑組成（50次反應(yīng)）
| 成分 | 規(guī)格/包裝 | 功能說明 |
| 2×qPCR MagicMix | 500μL（棕色管） | 含DNA聚合酶、dNTPs及優(yōu)化緩沖液 |
| 熒光PCR專用模板稀釋液 | 1mL（黃蓋） | 樣本及對照稀釋 |
| O104:H4 PCR引物混合物 | 100μL（白蓋） | 特異性擴(kuò)增目標(biāo)基因 |
| 陽性對照（O104:H4 DNA） | 50μL（紅蓋） | 定量標(biāo)準(zhǔn)品（1×10?拷貝/μL） |
| 陰性對照（超純水） | 1mL（無色蓋） | 污染監(jiān)控 |
操作流程
樣本DNA制備
樣本類型：糞便、食品或環(huán)境拭子。
提取方法：推薦柱式DNA提取試劑盒，或100℃裂解10分鐘（需離心取上清）。
反應(yīng)體系配制（20μL）
冰上按比例混合以下組分：
2×qPCR MagicMix：10μL
引物混合液：2μL
模板DNA：2μL（建議濃度≤100ng/μL）
超純水補足至20μL。
PCR擴(kuò)增程序
預(yù)變性：95℃ 5分鐘；
循環(huán)階段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號）；
熔解曲線分析：60℃~95℃（僅染料法需此步驟）。
注意事項
適用范圍：僅限科研，不可用于臨床診斷。
保存條件：-20℃避光保存，有效期12個月。
質(zhì)量控制：每次實驗需包含陽性對照和陰性對照，Ct值異常需重復(fù)檢測。
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