球孢白僵菌染料法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 球孢白僵菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Beauveria bassiana Dye-based qPCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR3636 |
產(chǎn)品概述
本試劑盒基于染料法熒光定量PCR技術開發(fā)，專用于檢測球孢白僵菌（Beauveria bassiana）的核酸，適用于科研用途，不可用于臨床診斷。試劑盒包含優(yōu)化引物、熒光染料、陽性對照及反應體系所需組分，具有高靈敏度和特異性，支持定性與定量分析。
產(chǎn)品組成
PCR反應液：預混含熒光染料（激發(fā)波長471 nm，發(fā)射波長530 nm）、dNTPs、Mg2?及穩(wěn)定劑。
引物混合液：針對球孢白僵菌高度保守區(qū)域設計，避免非特異性擴增。
陽性對照（1×10?拷貝/μL）：用于標準曲線繪制及實驗質控。
超純水：無核酸酶污染，用于體系稀釋。
規(guī)格：50次/盒（20 μL反應體系）。
儲存與運輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融（≤5次）。
保質期：未開封狀態(tài)下12個月。
實驗操作
1. 樣本準備
提供待測DNA模板（建議濃度10–100 ng/μL），避免RNA或蛋白污染。
2. PCR體系配置
按以下比例配制反應體系（單次20 μL）：
| 組分 | 體積（μL） |
| PCR反應液 | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板DNA | 2 |
| 超純水 | 6 |
陰性對照：以水替代模板DNA；陽性對照：使用試劑盒提供標準品。
3. 擴增程序
推薦循環(huán)參數(shù)（需根據(jù)儀器調整）：
| 步驟 | 溫度（℃） | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
| 預變性 | 95 | 3 min | 1 |
| 變性 | 95 | 15 sec | 40 |
| 退火/延伸 | 60 | 30 sec | |
| 信號采集 | 60 | 30 sec | |
注：信號采集設置在退火/延伸階段，熒光通道匹配染料特性（如FAM/SYBR Green）。
數(shù)據(jù)分析
定量檢測：以陽性對照log濃度為橫軸、Ct值為縱軸繪制標準曲線，計算待測樣本濃度。
定性判定：
陽性：Ct≤35，且擴增曲線呈典型S型。
陰性：Ct≥40或無擴增。
灰區(qū)（35<Ct<40）：需重復檢測，若Ct仍<40判為陽性。
注意事項
實驗分區(qū)操作，避免氣溶膠污染。
試劑解凍后需渦旋混勻，短暫離心后使用。
若用于絕對定量，建議使用梯度稀釋標準品（102–10?拷貝/μL）。
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關鍵字： 球孢白僵菌;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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