豬布魯氏桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 豬布魯氏桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Brucella suis Dye-based qPCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR3637 |
檢驗(yàn)原理
本試劑盒基于SYBR Green染料法實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，針對(duì)豬布魯氏桿菌基因組高度保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物，通過熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)核酸擴(kuò)增過程，實(shí)現(xiàn)定性及定量分析。擴(kuò)增過程中，熒光信號(hào)強(qiáng)度與目標(biāo)核酸含量成正比，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本中豬布魯氏桿菌的拷貝數(shù)。
試劑組成
擴(kuò)增預(yù)混液：含DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液及SYBR Green染料（500μL/管，避光保存）。
特異性引物混合液：豬布魯氏桿菌靶基因引物（100μL/管）。
陽性對(duì)照：1×10^8 拷貝/μL的豬布魯氏桿菌DNA片段（50μL/管）。
模板稀釋液：無核酸酶水（1mL/管，用于標(biāo)準(zhǔn)曲線制備）。
使用手冊(cè)：含操作流程及數(shù)據(jù)分析方法。
性能特點(diǎn)
高特異性：引物針對(duì)豬布魯氏桿菌保守序列設(shè)計(jì)，與其他病原體無交叉反應(yīng)。
高靈敏度：最低檢測(cè)限可達(dá)100拷貝/反應(yīng)。
閉管操作：減少氣溶膠污染風(fēng)險(xiǎn)。
即用型：預(yù)混反應(yīng)液簡(jiǎn)化操作步驟，僅需加入模板DNA。
適用范圍
科研用途：適用于豬布魯氏桿菌核酸的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，不可用于臨床診斷。
儲(chǔ)存與運(yùn)輸
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，有效期12個(gè)月。
運(yùn)輸方式：低溫干冰運(yùn)輸。
自備試劑與儀器
儀器：支持SYBR Green通道的實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。
耗材：PCR管、離心管、帶濾芯槍頭等。
操作步驟
樣本處理：提取待測(cè)樣本DNA（建議濃度≥10ng/μL）。
陽性對(duì)照稀釋：按10倍梯度稀釋陽性對(duì)照（10^2–10^7 拷貝/μL），用于標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。
反應(yīng)體系配制（20μL/反應(yīng)）：
預(yù)混液10μL + 引物混合液2μL + 模板DNA2μL + 超純水6μL。
PCR程序設(shè)置：
預(yù)變性：95℃ 5分鐘；
擴(kuò)增：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循環(huán)，采集熒光信號(hào)）。
數(shù)據(jù)分析：根據(jù)Ct值及標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本中目標(biāo)核酸含量。
注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)分區(qū)操作（試劑配制區(qū)、樣本處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)），避免交叉污染。
陽性對(duì)照需獨(dú)立稀釋，嚴(yán)禁直接使用高濃度原液。
反應(yīng)液避光保存，避免反復(fù)凍融。
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關(guān)鍵字： 豬布魯氏桿菌;染料法;PCR試劑盒;
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