山羊皰疹病毒通用染料法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 山羊皰疹病毒通用染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Caprine Herpesvirus Universal Dye-based qPCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR3647 |
檢驗(yàn)原理
本試劑盒基于SYBR Green染料法熒光定量PCR技術(shù)，針對(duì)山羊皰疹病毒1型或2型的高度保守序列設(shè)計(jì)特異性引物，確保與相近病原體無(wú)交叉反應(yīng)。靈敏度可達(dá)100~1000拷貝/反應(yīng)，線性范圍覆蓋5個(gè)數(shù)量級(jí)（10^1~10^6拷貝/μL），支持定性和定量分析。
試劑盒組成
2×qPCR MagicMix：預(yù)混含DNA聚合酶、dNTPs及優(yōu)化緩沖液（500 μL）。
熒光PCR專用模板稀釋液（1 mL）：用于標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋。
病毒特異性引物混合液（100 μL）：針對(duì)CpHV-1或CpHV-2設(shè)計(jì)。
陽(yáng)性對(duì)照（1×10^7~10^8拷貝/μL）：無(wú)傳染性DNA片段（50 μL）。
DNA病毒裂解液（試用裝）：可選用于樣本前處理（9 mL）。
使用手冊(cè)：含詳細(xì)操作流程及數(shù)據(jù)分析方法。
適用儀器
兼容主流熒光定量PCR儀，包括：
ABI 7500/QuantStudio系列
安捷倫MX3000P/3005P
Roche LightCycler
Bio-Rad CFX系列
Eppendorf Mastercycler ep realplex
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（10倍梯度稀釋）
標(biāo)記離心管（6~1號(hào)或7~2號(hào)），每管加45 μL稀釋液。
取陽(yáng)性對(duì)照依次稀釋（如6號(hào)管加5 μL 10^7拷貝/μL，得10^6拷貝/μL），渦旋混勻后冰上暫存。
2. PCR反應(yīng)體系配制（20 μL/反應(yīng)）
| 成分 | 體積（μL） |
| 2×qPCR MagicMix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板DNA | 2 |
| ROX（可選） | 0.4 |
| ddH?O | 補(bǔ)至20 |
3. 擴(kuò)增程序
預(yù)變性：95℃ 3分鐘
循環(huán)階段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光）
注意事項(xiàng)
分區(qū)操作：標(biāo)準(zhǔn)品稀釋需在獨(dú)立區(qū)域完成，避免氣溶膠污染。
質(zhì)量控制：建議每批次實(shí)驗(yàn)包含陰性對(duì)照（無(wú)模板對(duì)照）及陽(yáng)性對(duì)照。
應(yīng)用限制：僅限科研使用，不可用于臨床診斷。
引物特異性：1型與2型試劑盒引物不可混用，需根據(jù)目標(biāo)病毒選擇對(duì)應(yīng)產(chǎn)品。
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