產(chǎn)品用途
科研用途，用于偶發(fā)分枝桿菌（Mycobacterium fortuitum）的定性或定量檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 偶發(fā)分枝桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Mycobacterium fortuitum Dye-based qPCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測(cè)類型 | PCR檢測(cè) | 產(chǎn)品貨號(hào) | PR3536 |
試劑盒組成
PCR反應(yīng)液：包含優(yōu)化后的特異性引物、探針、dNTPs、緩沖液等。
陽(yáng)性對(duì)照：1×10^8拷貝/μL的偶發(fā)分枝桿菌DNA標(biāo)準(zhǔn)品。
DEPC-H2O：無(wú)核酸酶水，用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線。
ROX參比染料（根據(jù)機(jī)型選配）。
操作步驟
DNA提取（樣本制備區(qū)）
使用兼容的核酸提取試劑盒提取樣本DNA，確保純度（A260/A280比值1.8-2.0）。
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（獨(dú)立區(qū)域操作）
標(biāo)記6管，編號(hào)7至2，每管加45 μL DEPC-H2O。
梯度稀釋陽(yáng)性對(duì)照：
7號(hào)管：加5 μL陽(yáng)性對(duì)照（1×10^8拷貝/μL），震蕩混勻，得1×10^7拷貝/μL標(biāo)準(zhǔn)品。
依次稀釋至2號(hào)管，最終濃度范圍為1×10^7至1×10^2拷貝/μL。
PCR反應(yīng)體系配置（反應(yīng)配制區(qū)）
每20 μL反應(yīng)體系包含：
10 μL PCR反應(yīng)液
2 μL DNA模板（樣本或標(biāo)準(zhǔn)品）
0.5 μL ROX（根據(jù)機(jī)型需求）
7.5 μL DEPC-H2O
熒光定量PCR程序
預(yù)變性：95℃ 3分鐘。
循環(huán)階段（40 cycles）：
95℃ 15秒
60℃ 30秒（采集熒光信號(hào)）
數(shù)據(jù)分析
定性檢測(cè)：Ct值≤35判定為陽(yáng)性。
定量檢測(cè)：以標(biāo)準(zhǔn)曲線（log拷貝數(shù) vs. Ct值）計(jì)算樣本濃度。
性能參數(shù)
靈敏度：可檢測(cè)低至100拷貝/反應(yīng)。
特異性：針對(duì)偶發(fā)分枝桿菌保守序列設(shè)計(jì)，無(wú)交叉反應(yīng)。
穩(wěn)定性：-20℃保存有效期12個(gè)月，避免反復(fù)凍融。
注意事項(xiàng)
分區(qū)操作（樣本制備、反應(yīng)配制、擴(kuò)增區(qū)），避免污染。
陽(yáng)性對(duì)照需獨(dú)立處理，防止污染其他組分。
本試劑盒僅限科研使用，不適用于臨床診斷。
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關(guān)鍵字： 偶發(fā)分枝桿菌;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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