中華根瘤菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 中華根瘤菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Sinorhizobium spp. Universal Dye-based qPCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR3823 |
產(chǎn)品特點(diǎn)
即開即用：包含除引物和DNA模板外的所有組分，操作便捷。
高特異性：引物針對(duì)中華根瘤菌（Sinorhizobium spp.）保守序列設(shè)計(jì)，避免與其他微生物交叉反應(yīng)。
高靈敏度：可檢測(cè)低至單拷貝的DNA分子，線性范圍達(dá)5個(gè)數(shù)量級(jí)。
兼容性強(qiáng)：適用于多數(shù)核酸純化方法，提供陽性對(duì)照以區(qū)分假陰性結(jié)果。
雙重功能：支持定性與定量分析，結(jié)果可通過熒光信號(hào)直接判讀。
試劑盒組分
2×熒光定量PCR預(yù)混液（含染料、dNTPs、Mg2?、緩沖液及熱啟動(dòng)DNA聚合酶）
陽性對(duì)照（1×10?拷貝/μL中華根瘤菌DNA）
陰性對(duì)照（無核酸酶水）
使用說明書
操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（定量分析適用）
取6支離心管，依次標(biāo)記為7至2號(hào)，每管加入45μL模板稀釋液。
在7號(hào)管中加入5μL陽性對(duì)照（1×10?拷貝/μL），震蕩混勻，得到1×10?拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)品。
依次梯度稀釋至2號(hào)管，獲得1×10?至1×101拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。
樣本DNA制備
使用常規(guī)方法提取待測(cè)樣本DNA，建議設(shè)置陽性/陰性對(duì)照各1管。
純化后的DNA應(yīng)避免反復(fù)凍融，建議分裝保存。
qPCR反應(yīng)體系（20μL）
按以下比例配制反應(yīng)液（以單次反應(yīng)為例）：
2×預(yù)混液：10μL
引物（未提供）：各0.5μL（終濃度0.2μM）
DNA模板：2μL
無核酸酶水：補(bǔ)足至20μL
反應(yīng)程序：
預(yù)變性：95℃ 5分鐘
循環(huán)階段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號(hào)）
數(shù)據(jù)分析
定性檢測(cè)：通過Ct值判斷樣本是否含有目標(biāo)DNA（陰性對(duì)照應(yīng)無擴(kuò)增）。
定量檢測(cè)：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本中目標(biāo)DNA的拷貝數(shù)。
注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)前需校準(zhǔn)熒光定量PCR儀，確保光學(xué)參數(shù)匹配所用染料。
避免試劑反復(fù)凍融，預(yù)混液使用前需充分混勻并短暫離心。
操作時(shí)需佩戴手套，防止核酸污染。
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關(guān)鍵字： 中華根瘤菌通用;染料法熒光定量;RT-PCR試劑盒;
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