產品特點
即開即用：用戶僅需提供待測DNA樣本，試劑盒包含預混反應液，無需額外配制。
高特異性：針對脆弱擬桿菌保守序列設計引物，與其他腸道菌群無交叉反應。
高靈敏度：檢測限可達數百拷貝/反應。
一管式檢測：采用封閉式熒光定量PCR，避免擴增產物污染。
兼容性：適配常見熒光定量PCR儀，支持染料法檢測（激發(fā)波長471 nm，發(fā)射波長530 nm）。
產品名稱 | 脆弱擬桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Bacteroides fragilis Dye-based qPCR Kit |
產品規(guī)格 | 50T | 產品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產品貨號 | PR3706 |
實驗步驟
樣本準備：提取待測樣本DNA，建議濃度≥10 ng/μL。
反應體系配制：
在標記管中加入以下成分（以20μL體系為例）：
預混PCR反應液（含dNTPs、Mg2?、Taq酶）
特異性引物對
熒光染料（結合DNA后最大吸收峰500 nm）
模板DNA（≤5 μL）
陰性對照（無模板水）與陽性對照（含脆弱擬桿菌標準品）需同步設置。
PCR程序設置：
預變性：95℃ 2分鐘；
擴增循環(huán)：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（信號采集步驟），共40個循環(huán)。
注：具體參數可根據儀器型號優(yōu)化。
結果分析
定量檢測：
以陽性對照濃度的log值為橫軸，Ct值為縱軸繪制標準曲線。
通過待測樣本Ct值計算DNA濃度。
定性檢測：
陰性對照Ct值≥40，陽性對照Ct值≤30且呈典型擴增曲線。
待測樣本判定：
Ct≤35：陽性；
Ct≥40：陰性；
35<Ct<40：需重復檢測，若重復Ct<40判為陽性。
注意事項
操作需在無菌環(huán)境下進行，避免污染。
熒光染料需避光保存，防止淬滅。
試劑盒保存于-20℃，反復凍融不超過3次。
桿菌屬通用試劑盒技術參數整理，具體應用需結合脆弱擬桿菌靶標序列優(yōu)化驗證。
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關鍵字： 脆弱擬桿菌;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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