產(chǎn)品概述
本試劑盒用于特異性檢測微細(xì)毛圓線蟲（Trichostrongylus tenuis）的核酸，基于熒光定量PCR技術(shù)，通過擴(kuò)增保守基因序列實現(xiàn)高靈敏度、高特異性檢測。適用于科研實驗（嚴(yán)禁臨床醫(yī)療用途），兼容主流熒光定量PCR儀（如ABI、Bio-Rad系列）。
產(chǎn)品名稱 | 微細(xì)毛圓線蟲染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Trichostrongylus tenuis Dye-based qPCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR3720 |
產(chǎn)品特點
即開即用：預(yù)混反應(yīng)液含熒光染料、引物、dNTPs及熱啟動DNA聚合酶，僅需提供DNA模板。
高特異性：引物針對微細(xì)毛圓線蟲保守區(qū)設(shè)計，無交叉反應(yīng)。
質(zhì)控系統(tǒng)：含陽性質(zhì)控品（目標(biāo)基因片段）和陰性質(zhì)控品（超純水），確保結(jié)果可靠性。
快速檢測：全程約1.5小時，支持實時熒光監(jiān)測或終點電泳分析。
組分與規(guī)格
| 成分 | 規(guī)格（50次裝） |
| PCR預(yù)混液（含染料） | 1 mL（20 μL/反應(yīng)） |
| 特異性引物混合液 | 100 μL |
| 陽性質(zhì)控品 | 50 μL（1×10?拷貝/μL） |
| 陰性質(zhì)控品 | 1 mL（超純水） |
保存條件：-20℃避光保存，有效期12個月；陽性質(zhì)控品需單獨存放，避免污染。
操作流程
1. 樣本處理
DNA提取：使用核酸提取試劑盒從樣本（如組織、血液）中純化DNA，建議在生物安全柜中操作。
模板濃度：推薦使用10-100 ng/μL DNA。
2. 反應(yīng)體系配制
| 組分 | 體積（μL） |
| PCR預(yù)混液 | 15 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板DNA/對照品 | 3 |
| 總體積 | 20 |
加樣順序：陰性對照→待測樣本→陽性對照，避免交叉污染。
3. PCR擴(kuò)增程序
| 步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
| 預(yù)變性 | 95℃ | 3 min | 1 |
| 變性 | 95℃ | 10 sec | 35 |
| 退火 | 58℃ | 15 sec | |
| 延伸 | 72℃ | 20 sec | |
| 最終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
4. 結(jié)果分析
熒光定量法：FAM通道檢測，閾值線需高于陰性對照擴(kuò)增曲線。
陽性：Ct值≤45且曲線呈S型。
陰性：無Ct值或Ct值>45。
電泳法（可選）：取5 μL產(chǎn)物進(jìn)行2%瓊脂糖凝膠電泳，陽性樣本可見約200 bp條帶。
注意事項
實驗分區(qū)操作（試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)），避免氣溶膠污染。
若樣本無擴(kuò)增，建議稀釋10倍后復(fù)測以排除抑制劑干擾。
試劑解凍后需充分混勻，避免反復(fù)凍融。
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關(guān)鍵字： 微細(xì)毛圓線蟲;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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