偽旋毛蟲染料法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 偽旋毛蟲染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Trichinella pseudospiralis Dye-based qPCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR3825 |
產(chǎn)品概述
本試劑盒基于SYBR Green染料法熒光定量PCR技術(shù)，專用于偽旋毛蟲（Trichinella pseudospiralis）的快速、高靈敏度檢測。適用于科研領(lǐng)域中對血液、組織、糞便等樣本的定性或定量分析，支持低至100拷貝/反應(yīng)的目標(biāo)DNA檢測，線性范圍覆蓋5個數(shù)量級。
核心組成
2×qPCR MagicMix：含DNA聚合酶、dNTPs及優(yōu)化緩沖體系。
偽旋毛蟲特異性引物混合液：針對高度保守基因區(qū)域設(shè)計，無交叉反應(yīng)。
陽性對照：無傳染性DNA片段（1×10^8拷貝/μL，染料法起始濃度）。
自備試劑：樣品DNA模板、超純水、ROX（僅ABI 7500/7700/7900儀器需配置）。
保存與運輸
試劑盒：-20℃避光保存，有效期12個月。
樣本：短期可4℃保存，長期需-20℃（凍融≤3次），運輸需冰袋密封。
操作流程
1. 陽性對照稀釋（防污染操作）
標(biāo)記6管，每管加45μL專用稀釋液。
首管加5μL陽性對照（1×10^8拷貝/μL），震蕩混勻得1×10^7拷貝/μL溶液，依次10倍稀釋至1×10^2拷貝/μL。
2. 反應(yīng)體系配制（20μL/管）
| 組分 | 待測樣品管 | 陽性對照管 | 陰性對照管 |
| 2×qPCR MagicMix | 10 μL | 10 μL | 10 μL |
| 引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| ROX（或超純水） | 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| 樣品DNA/cDNA模板 | 6 μL | - | - |
| 稀釋后陽性對照 | - | 6 μL | - |
| 超純水 | - | - | 6 μL |
3. PCR擴增參數(shù)
預(yù)變性：95℃ 3分鐘；
循環(huán)：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循環(huán)，熒光采集）；
熔解曲線分析（染料法必需）：95℃ 15秒 → 60℃ 1分鐘 → 95℃ 15秒。
注意事項
分裝試劑避免反復(fù)凍融，陽性對照單獨存放。
不同儀器需優(yōu)化退火溫度或循環(huán)數(shù)（如iCycler IQ、LightCycler480等無需ROX）。
熔解曲線單峰表明特異性擴增，多峰需排查污染或引物二聚體。
質(zhì)量控制
陰性對照：無擴增曲線（Ct值≥40或無信號）。
陽性對照：Ct值≤30，否則需重復(fù)實驗。
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關(guān)鍵字： 偽旋毛蟲;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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