檢驗原理
本試劑盒基于SYBR Green I熒光染料法，針對小蛇菌屬高度保守基因區(qū)域設(shè)計特異性引物，通過實時熒光定量PCR技術(shù)對目標(biāo)核酸進行擴增檢測。反應(yīng)過程中釋放的熒光信號由儀器實時監(jiān)測，實現(xiàn)定性或定量分析。
產(chǎn)品名稱 | 小蛇菌屬通用染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Serpula spp. Universal Dye-based qPCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR3738 |
試劑組成
小蛇菌屬通用預(yù)混反應(yīng)液（含SYBR Green I、dNTPs、Taq酶等）
小蛇菌屬特異性引物混合液
陽性質(zhì)控品（無傳染性DNA片段，1×10^8拷貝/μL）
陰性質(zhì)控品（無核酸酶水）
說明書
儲存條件及有效期
-20℃±5℃避光保存，避免反復(fù)凍融（建議分裝），有效期12個月。
適用儀器
兼容主流熒光定量PCR儀（如ABI 7500、Bio-Rad CFX96、Roche LightCycler 480等）。
自備耗材與設(shè)備
無核酸酶離心管（0.2mL PCR管、1.5mL EP管）
濾芯吸頭（10μL、200μL、1000μL）
離心機、渦旋振蕩器、移液器
樣品要求
樣本類型：環(huán)境樣本（如土壤、水體）、臨床分離培養(yǎng)物等。
采集與保存：避免交叉污染，短期保存于-20℃，長期保存需-70℃以下（避免反復(fù)凍融）。
運輸：2~8℃冰袋運輸，嚴(yán)禁高溫暴露。
使用方法
樣本處理（需在潔凈區(qū)操作）：
按標(biāo)準(zhǔn)方法提取DNA，建議使用柱式核酸提取試劑盒。
陽性對照無需處理，陰性質(zhì)控品直接使用。
PCR反應(yīng)體系配制（冰上操作）：
每20μL反應(yīng)體系含：預(yù)混反應(yīng)液10μL、引物混合液2μL、模板DNA 2μL、無核酸酶水補足至20μL。
擴增程序（以ABI 7500為例）：
預(yù)變性：95℃ 5分鐘；
循環(huán)階段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光）；
熔解曲線分析：60~95℃（每0.5℃遞增，持續(xù)5秒）。
結(jié)果判讀：
定量分析：通過標(biāo)準(zhǔn)曲線（10^2~10^7拷貝/μL梯度稀釋）計算樣本濃度。
定性分析：
陽性：Ct值≤35，且熔解曲線峰值單一；
可疑：35<Ct<40，需重復(fù)檢測；
陰性：Ct值≥40或無擴增曲線。
注意事項
本產(chǎn)品僅限科研使用，不可用于臨床診斷或食品檢測。
實驗需分區(qū)操作（試劑配制區(qū)、樣本處理區(qū)、擴增區(qū)），避免氣溶膠污染。
不同批號組分不可混用，反應(yīng)液解凍后需徹底混勻。
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