飾紋汀蛙虹彩病毒染料法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 飾紋汀蛙虹彩病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Ranavirus sp. (Tiger Frog Isolate) Dye-based qPCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR3845 |
產(chǎn)品概述
本試劑盒專用于飾紋汀蛙虹彩病毒（Boheliridovirus, BIV）的熒光定量PCR檢測，采用染料法（如SYBR Green I）或探針法（如FAM-BHQ1標記）實現(xiàn)高特異性、高靈敏度的病毒核酸定量分析。適用于科研用途，不可用于臨床診斷。
試劑盒組成
PCR反應(yīng)預混液：含DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液及熒光染料（或預裝探針）。
陽性對照：10^8拷貝/μL的BIV DNA片段（非活體樣本，避免生物污染風險）。
陰性對照：無核酸酶水。
模板稀釋液：用于標準品梯度稀釋。
使用說明書（當前文件）。
操作步驟
標準品稀釋（以10^2–10^7拷貝/μL梯度為例）
注意事項：
稀釋操作需在獨立潔凈區(qū)域進行，避免交叉污染。
使用帶濾芯槍頭，所有離心管需預先標記（如7–2號對應(yīng)10^7–10^2拷貝/μL）。
稀釋流程：
在7號管中加入45 μL稀釋液，再加入5 μL陽性對照（10^8拷貝/μL），渦旋混勻，得到10^7拷貝/μL標準品。
依次梯度稀釋至2號管（10^2拷貝/μL），每步更換槍頭并充分混勻。
PCR反應(yīng)體系配制
按以下比例配制20 μL反應(yīng)體系（以探針法為例）：
預混液10 μL
引物混合液2 μL（上游引物：5’-AATGCTGACGAAATCATCAGTT-3’；下游引物：5’-TCCTTTTCCTCGTTGGAACAA-3’）
探針1 μL（FAM-BHQ1標記，序列：5’-TACGAATCGTTTCCCGTGAGACCCTTTAACG-3’）
模板DNA 2 μL
無核酸酶水補至20 μL
短暫離心后上機。
擴增程序設(shè)置
預變性：95℃ 3分鐘
循環(huán)階段（40 cycles）：
95℃ 15秒
60℃ 30秒（熒光采集）
溶解曲線分析（染料法需增加此步驟）。
結(jié)果判讀
定量分析：根據(jù)標準曲線計算樣本中病毒拷貝數(shù)。
特異性驗證：溶解曲線單峰或探針信號Ct值≤35為陽性。
質(zhì)控要求：
陰性對照無擴增（Ct值≥40或無信號）。
陽性對照Ct值在預期范圍內(nèi)。
注意事項
試劑保存于-20℃，避免反復凍融。
實驗廢棄物需按生物安全規(guī)范處理。
本產(chǎn)品僅限科研使用，不適用于臨床診斷。
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