細(xì)胞簡(jiǎn)介：
兔晶狀體上皮細(xì)胞分離自晶狀體組織；晶狀體源自胚胎發(fā)育外胚層，僅含有上皮細(xì)胞及其產(chǎn)物，晶狀體囊膜作為屏障將晶狀體與其它類型細(xì)胞完全分開(kāi)；因而，晶狀體上皮細(xì)胞培養(yǎng)既無(wú)神經(jīng)和血管組織的干擾，又不受其它類型細(xì)胞如成纖維細(xì)胞的污染，保證了培養(yǎng)中細(xì)胞成分的單一性。晶狀體上皮細(xì)胞主要負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)晶狀體的生理平衡，包括電解質(zhì)和液體的輸送。在正常的發(fā)育過(guò)程中，晶狀體上皮細(xì)胞分化和成熟，然后遷移到晶狀體內(nèi)部，產(chǎn)生晶體蛋白，自身也拉長(zhǎng)而變成晶狀體纖維細(xì)胞，并最終失去細(xì)胞核和其它的細(xì)胞器。研究表明，晶狀體上皮細(xì)胞的分化和極化受到了眼部液體中的生長(zhǎng)因子的調(diào)控，包括表皮生長(zhǎng)因子和胰島素等。細(xì)胞貼壁后為扁平不規(guī)則多角形，呈單層生長(zhǎng)、連成膜狀。晶狀體上皮細(xì)胞是緊密貼附于晶狀體前囊內(nèi)表面的單層上皮細(xì)胞，其異常增殖和分化與白內(nèi)障和后囊混濁的發(fā)生密切相關(guān)，體外培養(yǎng)是研究其生長(zhǎng)規(guī)律的主要手段。
產(chǎn)品名稱 | 兔晶狀體上皮細(xì)胞 | 產(chǎn)品貨號(hào) | P-X2219 |
英文名稱 | Rabbit Lens Epithelial Cells | 規(guī)格 | 5×10^5 |
報(bào)告 | 提供免疫熒光鑒定報(bào)告 | 組織來(lái)源 | 晶狀體組織 |
產(chǎn)品信息：
方法簡(jiǎn)介：實(shí)驗(yàn)室分離的兔晶狀體上皮細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過(guò)上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)：實(shí)驗(yàn)室分離的兔晶狀體上皮細(xì)胞經(jīng)CK18免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱：兔晶狀體上皮細(xì)胞
組織來(lái)源：晶狀體組織
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)信息：包被條件鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%胰蛋白酶兔晶狀體上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
原代細(xì)胞分離：
組織樣本處理：取材后立即置于預(yù)冷的含抗生素的PBS或組織保存液中，避免樣本干燥和溫度變化；修剪時(shí)去除壞死、結(jié)締組織等雜質(zhì)，盡量減小組織塊體積以提高消化效率。
消化方法選擇：
酶消化法：根據(jù)組織類型選對(duì)應(yīng)酶（如胰蛋白酶用于上皮類組織、膠原酶用于結(jié)締組織豐富的組織），嚴(yán)格控制消化溫度（通常37℃）和時(shí)間，每隔5-10分鐘鏡下觀察，避免過(guò)度消化損傷細(xì)胞。
機(jī)械分離法：適合柔軟組織（如腦、肝臟），通過(guò)剪碎、吹打、過(guò)濾等方式分散細(xì)胞，操作時(shí)動(dòng)作輕柔，減少細(xì)胞機(jī)械損傷。
細(xì)胞過(guò)濾與離心：用合適孔徑的細(xì)胞篩（如100-200目）過(guò)濾細(xì)胞懸液，去除未消化的組織塊；離心轉(zhuǎn)速通常為1000-1500rpm，時(shí)間5-10分鐘，避免高速離心導(dǎo)致細(xì)胞破裂。
細(xì)胞消化與傳代：
方法一：利多卡因消化法
吸出培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞1次
添加1ml 12mM利多卡因消化液，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶使液體覆蓋瓶底，37℃溫浴3-5分鐘
顯微鏡下觀察到細(xì)胞回縮變圓后，加入5ml完全培養(yǎng)基稀釋消化液
輕輕吹打混勻細(xì)胞，1200rpm離心5分鐘，棄上清后用完全培養(yǎng)基重懸接種
方法二：胰酶消化法
若利多卡因消化效果不佳，可更換為0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液，重復(fù)上述操作，消化時(shí)間控制在1-2分鐘
方法三：細(xì)胞刮取法
若細(xì)胞仍無(wú)法消化，加入3ml完全培養(yǎng)基終止消化，用無(wú)菌細(xì)胞刮輕輕刮取細(xì)胞（此方法易造成細(xì)胞機(jī)械損傷，不推薦）
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關(guān)鍵字： 兔晶狀體上皮細(xì)胞;上皮細(xì)胞樣; 貼壁;
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