產品名稱：根癌土壤桿菌

英文名：Agrobacterium tumefaciens

規(guī)格：凍干粉；斜面；菌液；平板

貨號：PJZ991

作用：植物遺傳工程菌

形態(tài)：菌落直徑為0.5-1mm，圓形，邊緣整齊，不透明，正面灰白色，中間凸起，表面明亮，表面光滑，質地濕潤，易挑起，G－（紅），桿菌

基本信息：

培養(yǎng)基  酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，氯化鈉：10.0，瓊脂：15.0，pH：7.0±0.2（25℃）

生長條件  30℃,18-24h,好氧

存儲條件  2-8℃

安全等級  1

形態(tài)  菌落直徑為0.5-1mm，圓形，邊緣整齊，不透明，正面灰白色，中間凸起，表面明亮，表面光滑，質地濕潤，易挑起，G－（紅），桿菌

模式菌株  no

操作步驟  ①準備上述平板2塊；②安瓿管表面消毒后在安全柜中打開，用酒精燈灼燒頂部，后迅速滴上無菌水使之破裂，隨后用鑷子將其敲碎；③吸取0.5mL無菌水打入凍干管，充分溶解菌粉后，打入2塊平板，200μL/個，涂布均勻；④將平板置于上述培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，菌種長出即可使用。

應用領域  植物遺傳工程菌

共享方式  公益性共享

產品描述：

根癌土壤桿菌（Agrobacterium tumefaciens），又稱農桿菌，是根瘤菌科土壤桿菌屬的革蘭氏陰性桿菌，具周生鞭毛，運動活潑，嚴格好氧。能通過感染植物傷口將Ti質粒上的T - DNA轉移至植物基因組，使植物細胞失控生長形成冠癭瘤（根癌），是植物腫瘤的重要病原菌?；谄浠蜣D移特性，根癌土壤桿菌被廣泛用于植物基因工程研究，是將外源基因導入植物細胞的重要工具菌株，為培育轉基因植物提供了關鍵技術支持。

復活步驟:

甘油管凍存菌株復活

超凈工作臺內，用無菌移液器吸取1-2ml適宜的液體培養(yǎng)基至無菌試管中。

用無菌槍頭吸取0.1-0.2ml凍存菌株菌液，加入上述液體培養(yǎng)基中，輕輕吹打混勻。

試管封口后，置于對應溫度的恒溫搖床（細菌180-220rpm，真菌120-150rpm）中培養(yǎng)12-24小時，或靜置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48小時，至培養(yǎng)基出現明顯渾濁。

取少量復蘇后的菌液，涂布于固體培養(yǎng)基平板上，倒置培養(yǎng)至單菌落長出，后續(xù)可進行純化保存。

凍干管菌株復活

超凈工作臺內，用75%酒精擦拭凍干管外壁，火焰灼燒管口（注意避免灼傷），然后用無菌鑷子輕輕敲開凍干管。

吸取0.5-1ml無菌液體培養(yǎng)基，緩慢加入凍干管中，輕輕振蕩使凍干菌粉完全溶解。

將溶解后的菌液全部轉移至裝有5-10ml液體培養(yǎng)基的無菌三角瓶中，充分混勻。

三角瓶封口后，置于最適溫度的搖床或培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)時間根據菌株類型調整（細菌12-24小時，真菌24-72小時）。

待培養(yǎng)基渾濁后，取菌液涂布固體平板，進行單菌落分離純化。

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準備工作：

環(huán)境與器材消毒：

在生物安全柜或超凈工作臺中操作。提前打開紫外燈照射30分鐘。

準備75%酒精噴灑雙手和工作臺面。

準備所需器材：無菌接種環(huán)、酒精燈、無菌吸管、涂布棒、試管架、打火機等。

培養(yǎng)基準備：

根據菌種類型選擇合適的培養(yǎng)基（如營養(yǎng)瓊脂、血平板、LB培養(yǎng)基等）。

將培養(yǎng)基從冰箱取出，恢復至室溫或進行預熱。

個人防護：

穿戴實驗服、手套、口罩。需在生物安全柜中操作并佩戴護目鏡。