三線鐮刀菌染料法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 三線鐮刀菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Fusarium tricinctum Dye-based qPCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR3991 |
檢驗(yàn)原理
本試劑盒基于SYBR Green染料法實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，針對(duì)三線鐮刀菌基因組高度保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物。通過熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)核酸擴(kuò)增過程，實(shí)現(xiàn)定性及定量分析，靈敏度可達(dá)數(shù)百拷貝/反應(yīng)。
試劑組成
擴(kuò)增預(yù)混液：含DNA聚合酶、dNTPs及優(yōu)化緩沖體系（50μL/管）
熒光PCR專用稀釋液：1 mL（用于模板稀釋）
三線鐮刀菌特異性引物混合物：100μL（靶向保守序列）
陽性對(duì)照（1×10^8 拷貝/μL）：50μL（紅蓋管）
陰性對(duì)照：1管（白蓋管）
操作步驟
樣本制備
推薦使用配套基因組DNA提取試劑盒，按標(biāo)準(zhǔn)流程提取樣本核酸。
反應(yīng)體系配制
解凍試劑后離心30秒，按每反應(yīng)孔加入18μL擴(kuò)增預(yù)混液、0.8μL引物混合物及0.2μL稀釋液。
分別加入2μL待測(cè)樣本、陽性對(duì)照或陰性對(duì)照模板，總反應(yīng)體積20μL。
PCR擴(kuò)增
按以下程序運(yùn)行：
預(yù)變性：95℃ 5分鐘
循環(huán)階段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號(hào)）
數(shù)據(jù)分析
使用儀器軟件分析擴(kuò)增曲線及Ct值，判定樣本中三線鐮刀菌核酸含量。
注意事項(xiàng)
避免反復(fù)凍融試劑，解凍后需充分混勻。
實(shí)驗(yàn)分區(qū)操作（樣本制備區(qū)、模板添加區(qū)、擴(kuò)增區(qū)），防止交叉污染。
陽性對(duì)照需與待測(cè)樣本分裝時(shí)段操作，建議最后處理。
性能參數(shù)
特異性：與常見鐮刀菌屬無交叉反應(yīng)。
靈敏度：最低檢測(cè)限為200拷貝/反應(yīng)。
重復(fù)性：批內(nèi)及批間變異系數(shù)≤5%。
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