產(chǎn)品基本信息
檢測方法：SYBR GreenⅠ熒光定量PCR
適用樣本：人源臨床樣本（外周血）、家畜血液樣本及蜱蟲樣本
檢測靶標：16S rRNA基因保守序列（特異性引物：1-25F/183-205R）
靈敏度：最低檢測限6.4×102 copies/μL，較常規(guī)PCR敏感性高100倍
特異性：無交叉反應(yīng)（排除綿羊無漿體、牛無漿體及環(huán)形泰勒蟲干擾）
重復性：批內(nèi)及批間變異系數(shù)<2%，穩(wěn)定性高
產(chǎn)品名稱 |
嗜吞噬細胞無漿體(無形體)染料法熒光定量PCR試劑盒
| 英文名稱 | Anaplasma phagocytophilum Dye-based qPCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR3932 |
試劑盒組分
qPCR預混液：含SYBR Green染料、dNTPs、熱啟動DNA聚合酶
引物混合液：特異性靶向Anaplasma phagocytophilum 16S rRNA基因
陽性對照：含重組質(zhì)粒（標準曲線構(gòu)建用，濃度梯度6.4×103~6.4×10? copies/μL）
陰性對照：無核酸酶水
樣本裂解緩沖液（可選）：用于血液或蜱蟲樣本核酸提取
操作步驟
樣本處理：
血液樣本：EDTA抗凝外周血200 μL，使用核酸提取試劑盒提取DNA。
蜱蟲樣本：研磨后離心取上清，提取DNA。
反應(yīng)體系配制（50 μL體系）：
預混液25 μL + 引物混合液2 μL + 模板DNA 5 μL + 無核酸酶水18 μL。
qPCR程序：
預變性：95℃ 5 min；
擴增：95℃ 15 sec → 60℃ 30 sec（40循環(huán)，熒光采集）；
熔解曲線分析：60℃~95℃，升溫速率0.3℃/sec。
結(jié)果分析
標準曲線：以陽性對照構(gòu)建，線性范圍6.4×103~6.4×10? copies/μL（R2≥0.99）。
閾值設(shè)定：閾值線需高于陰性對照熒光信號，基線設(shè)為6~15循環(huán)。
判讀標準：
陽性：Ct<38，熔解曲線單峰；
可疑：38≤Ct<40，需復測；
陰性：Ct≥40或無擴增。
注意事項
防污染措施：實驗分區(qū)操作（試劑配制區(qū)、樣本處理區(qū)、擴增區(qū)），使用帶濾芯槍頭。
質(zhì)量控制：每批實驗需包含陰/陽性對照，若陽性質(zhì)控Ct>35或陰性質(zhì)控出現(xiàn)擴增，實驗無效。
保存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。
臨床應(yīng)用
疾病診斷：人粒細胞無形體病（發(fā)熱、白細胞減少）、家畜貧血的早期檢測。
流行病學監(jiān)測：蜱蟲媒介中病原體定量分析。
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關(guān)鍵字： 嗜吞噬細胞無漿體(無形體);染料法;PCR試劑盒;
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