產(chǎn)品用途
科研實(shí)驗(yàn)，用于牛腸杯狀病毒RNA的定性或定量檢測。
產(chǎn)品名稱 | 牛腸道病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 英文名稱 | Bovine Enterovirus Dye-based qRT-PCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號(hào) | PR3962 |
試劑盒組成
RT-PCR預(yù)混液：包含DNA聚合酶（如Taq酶）、dNTPs、緩沖液及熒光染料（如SYBR Green）。
引物混合液：特異性靶向BECV基因序列的引物。
陽性對照：已知濃度的BECV RNA標(biāo)準(zhǔn)品，用于標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。
陰性對照：無RNA酶水，確保無污染。
超純水：用于反應(yīng)體系調(diào)整。
實(shí)驗(yàn)步驟
RNA模板制備：提取待測樣本RNA，建議使用5μL模板量。
反應(yīng)體系配制（以50μL為例）：
RT-PCR預(yù)混液：25μL
引物混合液：各2μL
RNA模板：5μL
超純水：補(bǔ)足至50μL
（標(biāo)準(zhǔn)曲線需梯度稀釋陽性對照，分別加入2-7號(hào)管）
PCR程序設(shè)置：
逆轉(zhuǎn)錄：50℃ 30分鐘
預(yù)變性：94℃ 10分鐘
擴(kuò)增循環(huán)（40次）：94℃ 15秒 → 60℃ 1分鐘（采集熒光信號(hào)）
結(jié)果分析
定量檢測：以陽性對照log濃度為橫軸、Ct值為縱軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算待測樣本濃度。
定性檢測：
陰性對照：Ct≥40或無擴(kuò)增曲線。
陽性對照：Ct≤30且曲線呈典型指數(shù)增長。
樣本判定：
Ct≤35：陽性；
Ct≥40：陰性；
35<Ct<40：重復(fù)檢測，若重復(fù)結(jié)果Ct<40且曲線起峰則判為陽性。
注意事項(xiàng)
操作需在無核酸污染環(huán)境下進(jìn)行，建議使用防污染試劑。
不同批次試劑避免混用，保存時(shí)避免反復(fù)凍融。
實(shí)驗(yàn)參數(shù)可根據(jù)儀器型號(hào)微調(diào)，建議優(yōu)先使用FAM通道采集信號(hào)。
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關(guān)鍵字： 牛腸道病毒;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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