檢驗(yàn)原理
采用SYBR Green染料法實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，針對(duì)葡萄球菌屬高度保守基因區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物，通過(guò)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增過(guò)程中的熒光信號(hào)，實(shí)現(xiàn)核酸的定性與定量分析。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 葡萄球菌屬通用染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱(chēng) | Staphylococcus spp. Universal Dye-based qPCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類(lèi) | 熒光定量PCR |
檢測(cè)類(lèi)型 | PCR檢測(cè) | 產(chǎn)品貨號(hào) | PR4092 |
試劑組成
核心組分
葡萄球菌屬通用擴(kuò)增液（含預(yù)混酶、dNTPs、緩沖液等）；
SYBR Green熒光染料；
陽(yáng)性對(duì)照（已知濃度葡萄球菌屬核酸）；
陰性對(duì)照（無(wú)核酸酶水）。
可選附加組件
部分提供RNA提取試劑（需用戶自備樣品模板）。
操作步驟
樣本準(zhǔn)備
提取待測(cè)樣本DNA/RNA，建議濃度≥10 ng/μL。
反應(yīng)體系配制（以20μL為例）
| 成分 | 體積（μL） |
| 擴(kuò)增液 | 10 |
| 模板DNA | 2 |
| 無(wú)核酸酶水 | 補(bǔ)至20 |
PCR程序設(shè)置
預(yù)變性：95℃ 5 min；
擴(kuò)增循環(huán)（40次）：95℃ 10 sec → 60℃ 30 sec（采集熒光信號(hào)）；
熔解曲線分析：60℃~95℃，每0.5℃遞增。
結(jié)果判讀
定量分析
通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線（陽(yáng)性對(duì)照Ct值-log濃度）計(jì)算待測(cè)樣本濃度。
定性分析
陽(yáng)性：Ct值≤35，且擴(kuò)增曲線呈S型；
陰性：Ct值≥40或無(wú)擴(kuò)增；
可疑（35<Ct<40）：需重復(fù)檢測(cè)。
注意事項(xiàng)
僅限科研使用，不可用于臨床診斷；
避免反復(fù)凍融試劑，分裝后使用；
操作時(shí)需佩戴防護(hù)用具，防止交叉污染；
不同引物探針設(shè)計(jì)可能存在差異，需根據(jù)說(shuō)明書(shū)調(diào)整實(shí)驗(yàn)條件。
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關(guān)鍵字： 葡萄球菌屬通用;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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