檢測原理
本試劑盒基于實時熒光定量RT-PCR技術(shù)，針對塞內(nèi)卡病毒基因組高度保守區(qū)域設(shè)計特異性引物和探針。探針5'端標(biāo)記熒光報告基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。在PCR擴(kuò)增過程中，Taq酶的5'核酸外切酶活性切割探針，使報告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離，釋放熒光信號。通過實時監(jiān)測熒光強(qiáng)度變化，實現(xiàn)對病毒RNA的定性和定量檢測。
產(chǎn)品名稱 | 塞內(nèi)卡病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 英文名稱 | Senecavirus (SVA) Probe-based Fluorescent Quantitative RT-PCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR4849 |
主要組成
RT-PCR反應(yīng)液：含緩沖液、dNTPs等，規(guī)格為437.5 μL（25 T/盒）或875 μL（50 T/盒）。
混合酶液：含逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq DNA聚合酶等，規(guī)格為62.5 μL（25 T/盒）或125 μL（50 T/盒）。
陽性對照：含塞內(nèi)卡病毒靶基因的質(zhì)粒（1×10^8拷貝/μL），40 μL/管。
陰性對照：滅菌純水，40 μL/管。
說明書：1份。
儲存條件及有效期
-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融，有效期12個月。
適用儀器
兼容主流熒光定量PCR儀，包括：
ABI 系列（如7500、QuantStudio）
Bio-Rad 系列（如CFX96）
Roche LightCycler 480
Agilent Stratagene MX系列
杭州博日系列等
樣本要求
樣本類型：血液、血清、肌肉或內(nèi)臟組織。
處理要求：
液體樣本：直接離心取上清。
組織樣本：研磨勻漿后離心（3000 rpm，10分鐘）取上清。
保存條件：
短期：2-8℃保存不超過24小時。
長期：-80℃凍存，避免反復(fù)凍融。
檢驗步驟
試劑準(zhǔn)備
解凍試劑并離心混勻，按反應(yīng)數(shù)（n=樣本數(shù)+3）配制混合液（每反應(yīng)含RT-PCR反應(yīng)液17.5 μL、混合酶液2.5 μL）。
分裝20 μL/管至PCR反應(yīng)管。
樣本處理
使用商業(yè)化RNA提取試劑盒提取樣本RNA。
加樣
每反應(yīng)管加入5 μL樣本RNA或?qū)φ掌?，終體積25 μL。
PCR擴(kuò)增
程序設(shè)置：
逆轉(zhuǎn)錄：50℃ 30分鐘
預(yù)變性：94℃ 10分鐘
擴(kuò)增（40循環(huán)）：94℃ 15秒 → 60℃ 1分鐘（采集FAM通道信號）
結(jié)果判讀
定量分析：以標(biāo)準(zhǔn)曲線（10^2-10^7拷貝/μL）計算樣本濃度。
定性分析：
陽性：Ct值≤35，擴(kuò)增曲線呈S型。
陰性：Ct值≥40或無擴(kuò)增曲線。
可疑（35<Ct<40）：需復(fù)測確認(rèn)。
注意事項
實驗分區(qū)操作（試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)），避免污染。
陽性對照需最后添加，防止氣溶膠污染。
本產(chǎn)品僅限科研使用，不可用于臨床診斷。
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關(guān)鍵字： 塞內(nèi)卡病毒;染料法熒光定量;RT-PCR試劑盒;
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