風(fēng)疹病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 風(fēng)疹病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 英文名稱 | Rubella Virus Dye-based qRT-PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR4607 |
預(yù)期用途
本試劑盒基于SYBR Green I 熒光染料法，利用實時熒光定量RT-PCR技術(shù)，定性檢測人血清、咽拭子、尿液或細胞培養(yǎng)物中的風(fēng)疹病毒RNA。適用于：
風(fēng)疹病毒感染早期診斷
先天性風(fēng)疹綜合征篩查
疫情監(jiān)測及病毒載量分析（相對定量）
注：臨床診斷需結(jié)合臨床表現(xiàn)和本地法規(guī)要求。
檢測原理
RNA提?。簶颖局胁《綬NA被純化。
逆轉(zhuǎn)錄（RT）：RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。
熒光定量PCR：
特異性引物擴增風(fēng)疹病毒靶基因（如E1包膜蛋白基因）。
SYBR Green I 染料嵌入雙鏈DNA，釋放熒光信號。
實時監(jiān)測熒光強度，生成擴增曲線，通過Ct值判定結(jié)果。
試劑盒組成
| 組分 | 規(guī)格（48測試） | 儲存條件 |
| qRT-PCR預(yù)混液（含SYBR Green） | 1.2 mL | -20℃避光 |
| 風(fēng)疹病毒引物混合液 | 100 μL × 2 | -20℃ |
| 逆轉(zhuǎn)錄酶 | 50 μL | -20℃ |
| RNase-Free水 | 1 mL | 室溫 |
| 陽性對照（風(fēng)疹病毒RNA） | 50 μL | -80℃ |
| 陰性對照（無RNA水） | 1 mL | -20℃ |
自備材料
RNA提取試劑盒（如柱式法）
實時熒光定量PCR儀（支持SYBR Green通道）
無核酸酶PCR管/板
離心機、移液器及滅菌吸頭
操作步驟
1. RNA提取
按RNA提取試劑盒說明操作，洗脫體積建議≤50 μL。
2. 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)（20 μL體系）
| 組分 | 體積 |
| RNA模板 | ≤8 μL |
| 逆轉(zhuǎn)錄酶 | 1 μL |
| 引物混合液 | 2 μL |
| RNase-Free水 | 補足至20 μL |
程序：42℃ 15 min → 85℃ 5 sec（滅活酶）→ 4℃保存。
3. 熒光定量PCR（25 μL體系）
| 組分 | 體積 |
| qRT-PCR預(yù)混液 | 12.5 μL |
| cDNA模板 | 2 μL |
| RNase-Free水 | 10.5 μL |
程序：
| 步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
| 預(yù)變性 | 95℃ | 5 min | 1 |
| 擴增 | 95℃ | 10 sec | 40 |
| | 60℃ | 30 sec | |
| 熔解曲線 | 65℃→95℃ | 0.5℃/sec | 1 |
結(jié)果判讀
陽性：Ct值 ≤ 35.0，且熔解曲線出現(xiàn)單一特異峰（Tm值：XX±2℃）。
可疑：Ct值 35.1–38.0，建議重復(fù)檢測。
陰性：Ct值 ≥ 38.0 或無Ct值。
注：陰性/陽性對照必須符合預(yù)期，否則實驗無效。
性能參數(shù)
靈敏度：檢出限 ≤ 50 copies/mL
特異性：不與麻疹病毒、腮腺炎病毒等交叉反應(yīng)
重復(fù)性：Ct值變異系數(shù)（CV）≤ 5%
線性范圍：102 ~ 10? copies/mL（R2 > 0.99）
注意事項
嚴格分區(qū)操作（試劑準備區(qū)→樣本處理區(qū)→擴增區(qū)），避免污染。
熔解曲線分析是區(qū)分非特異性擴增的關(guān)鍵步驟。
試劑解凍后置于冰上使用，避免反復(fù)凍融（≤3次）。
本產(chǎn)品僅用于科研，臨床診斷需經(jīng)國家藥監(jiān)局批準。
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關(guān)鍵字： 風(fēng)疹病毒;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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