檢測(cè)原理

基于TaqMan探針技術(shù)，通過(guò)Taq酶的5'→3'核酸外切酶活性切割探針，釋放熒光報(bào)告基團(tuán)（FAM通道），實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)定量。探針5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)，擴(kuò)增過(guò)程中熒光信號(hào)與產(chǎn)物累積量成正比，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算模板起始濃度。

產(chǎn)品特點(diǎn)

高靈敏性：檢測(cè)限低至100拷貝/反應(yīng)，線性范圍覆蓋5個(gè)數(shù)量級(jí)（10^1~10^6拷貝/μL）。

高特異性：針對(duì)米曲霉保守序列設(shè)計(jì)引物及探針，無(wú)交叉反應(yīng)。

即開(kāi)即用：預(yù)混緩沖液、酶混合液及優(yōu)化引物探針，僅需提供樣品RNA/DNA模板。

質(zhì)控完善：含陽(yáng)性對(duì)照（1×10^8拷貝/μL）及陰性對(duì)照，確保結(jié)果可靠性。

適用范圍：科研用途（不可用于臨床診斷）。

試劑盒組成

| 成分 | 規(guī)格 |

| 探針?lè)╭PCR緩沖液 | 500μL |

| 探針?lè)╭PCR酶混合液 | 100μL |

| 熒光PCR模板稀釋液 | 1 mL |

| 米曲霉引物混合液 | 100μL |

| 米曲霉探針 | 50μL |

| 陽(yáng)性對(duì)照（1×10^8拷貝/μL） | 50μL |

| 說(shuō)明書 | 1份 |

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

用陽(yáng)性對(duì)照按10倍梯度稀釋（10^7~10^2拷貝/μL），每個(gè)梯度單獨(dú)使用帶芯槍頭操作，避免污染。

2. 樣品制備

提取樣品RNA/DNA，建議設(shè)置N+2個(gè)樣本（含陰/陽(yáng)性對(duì)照）。

陰性對(duì)照：超純水；陽(yáng)性對(duì)照：試劑盒提供模板。

3. PCR反應(yīng)體系（20μL）

| 成分 | 體積 |

| qPCR緩沖液 | 10μL |

| 酶混合液 | 2μL |

| 探針 | 1μL |

| 引物混合液 | 2μL |

| 模板 | 5μL |

4. 反應(yīng)程序

| 步驟 | 溫度 | 時(shí)間 |

| 逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃ | 30 min |

| 預(yù)變性 | 94℃ | 10 min |

| 擴(kuò)增（40循環(huán)） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信號(hào)） |

數(shù)據(jù)分析

定量分析：以標(biāo)準(zhǔn)曲線log值為橫軸、Ct值為縱軸，計(jì)算樣品濃度。

定性分析：陰性對(duì)照Ct≥40，陽(yáng)性對(duì)照Ct≤35為有效。

注意事項(xiàng)

操作分區(qū)進(jìn)行（試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)），避免氣溶膠污染。

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋需獨(dú)立操作，防止交叉污染。

反復(fù)凍融不超過(guò)3次，建議分裝保存。

公司正在出售的產(chǎn)品