檢測原理
基于TaqMan探針法熒光定量PCR技術(shù)，針對黑曲霉高度保守基因區(qū)域設(shè)計特異性引物及探針。通過實時監(jiān)測擴增過程中的熒光信號（FAM通道），實現(xiàn)核酸的定性與定量檢測，靈敏度高（可檢測低至10^1拷貝/μL），線性范圍達5個數(shù)量級。
產(chǎn)品名稱 | 黑曲霉探針法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Aspergillus niger Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR4879 |
試劑盒組成
qPCR緩沖液（500μL）
酶混合液（50μL）
熒光PCR模板稀釋液（1mL）
引物-探針干粉（50T）
陽性對照（10^7拷貝/μL，50μL）
陰性對照（無核酸酶水，50μL）
操作步驟
標準曲線制備
標記6管，分別加入45μL稀釋液。
梯度稀釋陽性對照（10^7拷貝/μL起始），依次得到10^6~10^1拷貝/μL的標準品，冰上暫存。
樣本DNA提取
使用兼容的核酸提取試劑盒，建議設(shè)置N+2管（含陽性/陰性對照）。
qPCR反應(yīng)設(shè)置
體系：20μL/反應(yīng)（含19μL預(yù)混液+1μL模板）。
程序：
50℃ 10min（逆轉(zhuǎn)錄，若需）；
95℃ 10min（預(yù)變性）；
95℃ 15sec → 60℃ 60sec（40循環(huán)，F(xiàn)AM通道采集信號）。
數(shù)據(jù)分析
定量：以標準曲線log值為橫軸，Ct值為縱軸計算樣本濃度。
定性：
陽性：Ct≤35且呈指數(shù)曲線；
可疑：35<Ct≤38，需復測；
陰性：Ct≥40或無擴增。
注意事項
分區(qū)操作：樣本處理、試劑配制、擴增需在不同區(qū)域進行，避免污染。
質(zhì)量控制：每批次實驗需包含陰/陽性對照。
樣本要求：
短期保存于-20℃，長期需-70℃（避免反復凍融）；
運輸使用2~8℃冰袋。
局限性：
基因突變可能導致假陰性；
交叉污染或操作失誤可能導致假陽性。
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關(guān)鍵字： 黑曲霉;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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