赤霉菌探針法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 赤霉菌探針法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Gibberella Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR4816 |
檢驗原理
本試劑盒基于探針法熒光定量PCR技術，針對赤霉菌（Gibberella fujikuroi）高度保守基因區(qū)域設計特異性引物及探針，通過實時監(jiān)測熒光信號實現(xiàn)核酸的定性與定量檢測。
靈敏度：最低檢測限達100拷貝/反應。
特異性：不與相近微生物DNA發(fā)生交叉反應。
線性范圍：定量檢測時覆蓋5個數(shù)量級（10^1–10^6拷貝/μL）。
對照設置：提供無傳染性DNA片段作為陽性對照，便于區(qū)分假陰性。
適用儀器
兼容主流熒光定量PCR儀，包括：
ABI系列（如7500、StepOnePlus）
安捷倫（MX3000P/3005P）
Roche LightCycler
Bio-Rad（CFX系列）
Eppendorf Mastercycler ep realplex
自備試劑與耗材
樣本DNA：需用戶自行提?。ㄍ扑]柱式提取試劑盒或免提取核酸釋放劑）。
耗材：無菌帶濾芯槍頭、PCR管、離心管、冰盒等。
操作步驟
1. 標準曲線制備（獨立區(qū)域操作）
標記6管（6–1號），依次加入45 μL專用稀釋液。
從陽性對照（10^7拷貝/μL）開始，10倍梯度稀釋至10^1拷貝/μL（每步換槍頭，冰上保存）。
2. 樣本處理
設置N+2個提?。ê栃詫φ誔C和陰性對照NC）。
PC：陽性對照稀釋液（10^4拷貝/μL）模擬樣本體積；NC：超純水。
3. qPCR反應體系（20μL/管）
| 成分 | 樣品管 | 陰性對照 | 標準曲線管 |
| qPCR緩沖液 | 10 μL | 10 μL | 10 μL |
| 酶混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| 探針引物混合液 | 3 μL | 3 μL | 3 μL |
| 模板DNA | 5 μL | — | — |
| 標準曲線稀釋液 | — | — | 5 μL |
| 超純水（補足體積） | — | 5 μL | — |
4. 反應程序
預變性：95℃ 10 min
循環(huán)（40次）：95℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM通道信號）
結(jié)果判讀
定量分析：以陽性對照log濃度為橫軸、Ct值為縱軸繪制標準曲線，計算樣本濃度。
定性分析：
陽性：Ct≤36，且溶解曲線Tm值與對照一致。
陰性：Ct≥40。
可疑值（36<Ct<40）：需重復檢測。
注意事項
分區(qū)操作：試劑配制、樣本處理、擴增需在不同區(qū)域進行，避免交叉污染。
質(zhì)量控制：
陰性對照無Ct值，陽性對照Ct≤36。
若陰性對照出現(xiàn)擴增，提示污染，實驗無效。
局限性：
基因突變可能導致假陰性；
提取效率差異或運輸不當可能影響結(jié)果準確性。
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關鍵字： 赤霉菌;探針法熒光定量;PCR試劑盒;
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