隱球菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 隱球菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Universal Cryptococcus Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR4814 |
預(yù)期用途
本試劑盒用于檢測(cè)樣本中隱球菌屬的DNA，適用于科研實(shí)驗(yàn)，不可用于臨床診斷。
產(chǎn)品特點(diǎn)
即開即用：用戶僅需提供樣品核酸模板（DNA或RNA），無需額外配制主反應(yīng)混合液。
高靈敏度與特異性：
探針及引物針對(duì)隱球菌保守序列設(shè)計(jì)，可檢測(cè)低至幾百拷貝/反應(yīng)的靶標(biāo)，且與其他病原體無交叉反應(yīng)。
采用探針法（TaqMan原理），通過5'核酸外切酶活性切割探針釋放熒光信號(hào)，定量準(zhǔn)確性高。
多重質(zhì)控：
提供無傳染性陽性對(duì)照（DNA片段），便于區(qū)分假陰性結(jié)果。
推薦設(shè)置樣品制備陽性對(duì)照（PC）和陰性對(duì)照（NC）。
兼容性：支持常規(guī)RNA/DNA提取方法，或搭配柱式核酸純化試劑使用。
靈活應(yīng)用：可進(jìn)行定性（陰陽性判定）或定量分析（線性范圍達(dá)5個(gè)數(shù)量級(jí)）。
試劑盒組成
| 成分 | 規(guī)格 | 保存條件 |
| qPCR緩沖液 | 500 μL | -20℃ |
| 酶預(yù)混液（含逆轉(zhuǎn)錄酶） | 100 μL | -20℃ |
| 熒光探針（FAM標(biāo)記） | 50 μL | 避光，-20℃ |
| 引物混合液 | 100 μL | -20℃ |
| 陽性對(duì)照（1×10^8 拷貝/μL） | 50 μL | -20℃ |
| 模板稀釋液 | 1 mL | -20℃ |
| 說明書 | 1份 | - |
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（10倍梯度稀釋）
注意事項(xiàng)：稀釋需在獨(dú)立區(qū)域操作，避免氣溶膠污染。
步驟：
標(biāo)記6管（7至2號(hào)），分別加入45 μL模板稀釋液。
取5 μL陽性對(duì)照（1×10^8 拷貝/μL）加入7號(hào)管，混勻后得1×10^7 拷貝/μL標(biāo)準(zhǔn)品。
依次稀釋至2號(hào)管（1×10^2 拷貝/μL），冰上保存?zhèn)溆谩?/span>
2. 樣品核酸提取
推薦使用商業(yè)核酸提取試劑盒，或按以下方法：
PC設(shè)置：陽性對(duì)照稀釋10^4倍后作為提取對(duì)照。
NC設(shè)置：以超純水作為陰性對(duì)照。
3. qPCR反應(yīng)體系（20 μL/管）
| 組分 | 體積（μL） |
| qPCR緩沖液 | 10 |
| 酶預(yù)混液 | 2 |
| 探針 | 1 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板（樣品/標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照） | 5 |
4. 反應(yīng)程序
| 步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
| 逆轉(zhuǎn)錄* | 50℃ | 30 min | 1 |
| 預(yù)變性 | 94℃ | 10 min | 1 |
| 擴(kuò)增 | 94℃ | 15 sec | 40 |
| | 60℃ | 1 min（采集FAM信號(hào)） | |
*注：若檢測(cè)DNA模板，可跳過逆轉(zhuǎn)錄步驟。
數(shù)據(jù)分析
定量檢測(cè)：以標(biāo)準(zhǔn)品log濃度為橫軸、Ct值為縱軸繪制曲線，計(jì)算樣品濃度。
定性檢測(cè)：
陽性：Ct ≤ 35，且擴(kuò)增曲線呈S型。
陰性：Ct ≥ 40。
可疑（35 < Ct < 40）：需復(fù)測(cè)確認(rèn)。
注意事項(xiàng)
避免反復(fù)凍融試劑，分裝保存。
實(shí)驗(yàn)分區(qū)操作（試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)），防止污染。
本產(chǎn)品僅限科研使用，有效期12個(gè)月（-20℃保存）。
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