格特隱球菌探針法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 格特隱球菌探針法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Cryptococcus gattii Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR4815 |
產(chǎn)品特點(diǎn)
即開即用：用戶僅需提供樣品DNA模板，無需額外優(yōu)化引物或探針。
高靈敏性與特異性：引物及探針針對格特隱球菌高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，避免與其他微生物DNA交叉反應(yīng)。
雙功能檢測：支持定性與定量分析，定量線性范圍達(dá)5個(gè)數(shù)量級（10^1–10^6拷貝/μL）。
內(nèi)置對照：提供無傳染性DNA片段作為陽性對照，便于區(qū)分假陰性結(jié)果。
組分清單
| 編號 | 成分 | 規(guī)格 | 包裝標(biāo)識 |
| 試劑一 | 2×Probe qPCR MagicMix | 500μL | 本色蓋 |
| 試劑二 | qPCR引物混合液 | 100μL | 白蓋 |
| 試劑三 | 熒光PCR專用模板稀釋液 | 1mL | 黃蓋 |
| 試劑四 | qPCR探針（FAM通道，NFQ淬滅） | 50μL | 棕色管 |
| 試劑五 | 陽性對照（1×10^8拷貝/μL） | 50μL | 紅蓋 |
| - | 使用手冊 | 1份 | - |
運(yùn)輸與保存
運(yùn)輸條件：低溫運(yùn)輸（-20℃冰袋）。
保存條件：-20℃避光保存，有效期12個(gè)月。
操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（10倍梯度稀釋）
標(biāo)記6支離心管（6–1號），每管加入45μL模板稀釋液。
取5μL陽性對照（10^8拷貝/μL）加入6號管，震蕩混勻得10^7拷貝/μL標(biāo)準(zhǔn)品，依次稀釋至10^1拷貝/μL。
所有稀釋步驟需在獨(dú)立區(qū)域進(jìn)行，避免交叉污染。
樣品DNA制備
建議設(shè)置N+2個(gè)樣本（含陽性/陰性對照），使用兼容的DNA提取試劑盒純化。
qPCR反應(yīng)體系（20μL）
| 成分 | 樣品管 | 陰性對照 | 標(biāo)準(zhǔn)曲線管 |
| 2×Probe MagicMix | 10μL | 10μL | 10μL |
| 引物混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
| 探針 | 1μL | 1μL | 1μL |
| 模板DNA/標(biāo)準(zhǔn)品/水 | 7μL | 7μL水 | 7μL標(biāo)準(zhǔn)品 |
PCR程序
| 步驟 | 溫度 | 時(shí)間 |
| 預(yù)變性 | 95℃ | 3分鐘 |
| 40循環(huán) | 95℃ | 15秒 |
| （FAM信號采集） | 60℃ | 60秒 |
數(shù)據(jù)分析
定量檢測：以標(biāo)準(zhǔn)曲線log值為橫軸、Ct值為縱軸計(jì)算樣品濃度。
定性檢測：陰性對照Ct≥40；陽性對照Ct≤30（或39），樣品Ct≤閾值判為陽性。
注意事項(xiàng)
嚴(yán)格分區(qū)操作（樣本處理、試劑配制、擴(kuò)增），避免污染。
使用帶芯吸頭，每次更換槍頭。
反應(yīng)液避光保存，避免反復(fù)凍融。
實(shí)驗(yàn)后需用10%次氯酸或75%乙醇消毒工作臺。
局限性聲明
檢測結(jié)果可能受樣本質(zhì)量、提取效率、病原體變異等因素影響，建議結(jié)合臨床指標(biāo)綜合判斷。
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