檢測原理
基于實時熒光定量PCR技術(shù)，通過特異性探針與靶DNA結(jié)合，在擴增過程中釋放熒光信號，實現(xiàn)對月季花DNA的定性檢測。引物及探針經(jīng)生物信息學(xué)驗證，確保100%種屬特異性，靈敏度達103 copies/μL。
產(chǎn)品名稱 | 月季花探針法PCR鑒定試劑盒 | 英文名稱 | Flos Rosae Chinensis Probe-based PCR Identification Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR4914 |
試劑盒組成
PCR反應(yīng)液：含dNTPs、Mg2?、緩沖體系及熱啟動酶。
探針引物混合液：特異性引物對及熒光標記探針。
陽性對照：人工合成月季花靶基因片段（1×10? copies/μL）。
陰性對照：無核酸酶水。
使用說明書（當前文件）。
操作步驟
1. 實驗分區(qū)要求
試劑準備區(qū)：配制反應(yīng)體系，需使用無核酶耗材。
樣本處理區(qū)：在生物安全柜中提取DNA，操作溫度0-4℃。
擴增區(qū)：獨立儀器及耗材，避免交叉污染。
2. 樣本處理
提取DNA后立即檢測，或-80℃短期保存。
3. PCR體系配制（50μL體系）
| 組分 | 體積（μL） |
| PCR反應(yīng)液 | 25 |
| 探針引物混合液 | 5 |
| 模板DNA | 5-10 |
| 無核酸酶水 | 補足至50 |
4. 擴增程序
預(yù)變性：95℃ 5 min
循環(huán)（40次）：95℃ 15 sec → 60℃ 30 sec（采集熒光）
5. 結(jié)果判讀
陽性：Ct值≤35，且擴增曲線呈S型。
陰性：無擴增曲線或Ct值＞38。
注意事項
防污染措施：
使用帶濾芯吸頭，分區(qū)操作。
擴增后產(chǎn)物需無害化處理（如10%次氯酸浸泡）。
儀器設(shè)置：
ABI系列儀器需關(guān)閉ROX校正，淬滅基因選擇“None”。
質(zhì)控要求：
每批次實驗需包含陰/陽性對照。
不同批號試劑禁止混用。
性能參數(shù)
特異性：經(jīng)40種近緣種驗證，無交叉反應(yīng)。
靈敏度：最低檢測限103 copies/μL。
重現(xiàn)性：批內(nèi)/批間變異系數(shù)＜5%。
局限性說明
樣本質(zhì)量、提取方法或病原體變異可能導(dǎo)致假陰性。
污染或操作不當可能引起假陽性。
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關(guān)鍵字： 月季花;探針法;PCR鑒定試劑盒;
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