草地貪夜蛾細胞基因組DNA殘留探針法熒光定量PCR試劑盒(不含內(nèi)參)

商品屬性

產(chǎn)品概述

本產(chǎn)品是專為檢測草地貪夜蛾(Sf9)細胞基因組DNA殘留設(shè)計的探針法熒光定量PCR試劑盒，采用實時熒光定量PCR技術(shù)，可實現(xiàn)對DNA樣品的高靈敏度定量和定性分析。本試劑盒不含內(nèi)參，適用于科研用途。

產(chǎn)品規(guī)格

規(guī)格：50次20μL體系反應(yīng)

保存條件：-20℃避光保存

保質(zhì)期：1年

運輸條件：低溫運輸

產(chǎn)品特點

即開即用設(shè)計，用戶只需提供樣品DNA模板

優(yōu)化引物設(shè)計，靈敏度高，檢測限可達1×10E2拷貝/μL

提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品

特異性強，不會與其他生物樣本DNA發(fā)生交叉反應(yīng)

適用于定性和定量檢測，定量線性范圍達5個數(shù)量級

兼容大多數(shù)市售核酸提取試劑盒

實驗原理

本試劑盒基于TaqMan探針技術(shù)原理，在PCR反應(yīng)體系中加入特異性熒光探針。探針與靶序列特異性雜交后，在PCR擴增過程中被Taq酶水解，釋放熒光信號，通過實時監(jiān)測熒光信號積累來定量分析目標DNA。

試劑盒組分

qPCR預(yù)混液(含dNTPs、Taq DNA聚合酶等)

特異性引物對

TaqMan探針

陽性對照(1×10E8拷貝/μL)

DEPC-H2O(陰性對照)

使用方法

DNA提取(樣本制備區(qū))

使用自選方法提取純化樣品DNA，推薦使用市售核酸提取試劑盒。

標準曲線制備(樣本制備區(qū))

標記6支離心管(7-2號)

每管加入45μL DEPC-H2O

按10倍梯度稀釋陽性對照，獲得1×10E7至1×10E2拷貝/μL的標準品系列

若僅需定性檢測，將陽性對照稀釋至1×10E5拷貝/μL即可

反應(yīng)體系配制(試劑準備區(qū))

計算所需反應(yīng)管數(shù)(N個樣品+1個陰性對照+6個陽性對照)

每管加入18μL預(yù)混液

轉(zhuǎn)移至樣本準備區(qū)

模板添加(模板添加區(qū))

每管加入2μL相應(yīng)模板

加樣順序：陰性對照→待測樣品→陽性對照

短暫離心混勻

PCR擴增(擴增及產(chǎn)物分析區(qū))

將反應(yīng)管置于qPCR儀中

運行以下程序：

95℃ 10min(預(yù)變性)

95℃ 15sec → 60℃ 1min，40個循環(huán)

結(jié)果分析

定量分析

以陽性對照濃度的log值為橫軸，Ct值為縱軸繪制標準曲線

根據(jù)樣品Ct值推算DNA濃度

定性分析

陽性對照：Ct值<30，典型S型擴增曲線

陰性對照：Ct值>38或無Ct值

樣品判定：

陽性：Ct值<35，明顯指數(shù)增長

陰性：Ct值>38或無Ct值

可疑：Ct值35-38，需復(fù)檢

注意事項

實驗操作需在分區(qū)(樣本制備區(qū)、試劑準備區(qū)、擴增區(qū))進行，避免污染

使用前所有組分需完全融化，混勻并短暫離心

反應(yīng)液需避光保存，避免氣泡產(chǎn)生

使用一次性吸頭、手套和專用工作服

實驗后使用10%次氯酸或75%酒精消毒工作臺

陽性對照需單獨存放，防止污染其他組分

本產(chǎn)品僅限科研使用

質(zhì)量控制

陰性對照：Ct值應(yīng)>38或無Ct值

陽性對照：Ct值應(yīng)<30

標準曲線相關(guān)系數(shù)R2應(yīng)≥0.98

擴增效率應(yīng)在90-110%之間

公司正在出售的產(chǎn)品