產(chǎn)品用途
專(zhuān)用于血竭（Sanguis draxonis/Daemonorops draco）的核酸定性或定量檢測(cè)，僅限科研使用，不可用于臨床。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 血竭探針?lè)?/span>PCR鑒定試劑盒 | 英文名稱(chēng) | Sanguis Draxonis Probe-based PCR Identification Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類(lèi) | 熒光定量PCR |
檢測(cè)類(lèi)型 | PCR檢測(cè) | 產(chǎn)品貨號(hào) | PR4929 |
技術(shù)原理
基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）探針?lè)ǎ?/span>
探針設(shè)計(jì)：5'端標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。擴(kuò)增時(shí)Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探針，釋放熒光信號(hào)，通過(guò)熒光強(qiáng)度變化定量靶序列。
特異性：引物及探針針對(duì)血竭高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，避免與其他物種交叉反應(yīng)。
檢測(cè)流程
反轉(zhuǎn)錄（若檢測(cè)RNA）：將RNA模板逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。
擴(kuò)增與檢測(cè)：實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)，生成擴(kuò)增曲線(xiàn)和Ct值。
試劑盒組成
| 成分 | 規(guī)格 | 功能 |
| qRT-PCR緩沖液 | 500μL | 提供反應(yīng)體系基礎(chǔ)環(huán)境 |
| 酶混合液 | 100μL | 含逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶等 |
| 熒光探針 | 50μL | 特異性結(jié)合靶序列 |
| 引物混合液 | 100μL | 擴(kuò)增目標(biāo)片段 |
| 陽(yáng)性對(duì)照 | 50μL（1×10?拷貝/μL） | 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)有效性 |
| 模板稀釋液 | 1mL | 標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋 |
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備（定量分析）
將陽(yáng)性對(duì)照按10倍梯度稀釋?zhuān)?02~10?拷貝/μL），用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
2. 樣品處理
核酸提?。菏褂眉嫒莸?/span>RNA/DNA提取試劑盒純化樣本，建議設(shè)置陰/陽(yáng)對(duì)照。
反應(yīng)體系配置（以20μL為例）：
模板DNA/RNA 5μL
緩沖液10μL、酶混合液2μL、探針1μL、引物2μL
3. PCR程序
| 步驟 | 溫度 | 時(shí)間 |
| 逆轉(zhuǎn)錄（若需） | 50℃ | 30 min |
| 預(yù)變性 | 94℃ | 10 min |
| 擴(kuò)增循環(huán)（40次） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集熒光） |
4. 結(jié)果分析
定量：通過(guò)Ct值與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算起始模板濃度。
定性：
陽(yáng)性：Ct≤35，擴(kuò)增曲線(xiàn)呈S型。
陰性：Ct≥40或無(wú)擴(kuò)增。
注意事項(xiàng)
分區(qū)操作：避免標(biāo)準(zhǔn)品與樣本交叉污染。
質(zhì)量控制：陰性對(duì)照需無(wú)擴(kuò)增，陽(yáng)性對(duì)照Ct≤30。
重復(fù)驗(yàn)證：Ct值在35-40需復(fù)測(cè)。
存儲(chǔ)：試劑避光保存，避免反復(fù)凍融。
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關(guān)鍵字： 血竭;探針?lè)?PCR鑒定試劑盒;
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