蘋(píng)果銹果類(lèi)病毒探針?lè)晒舛?/span>RT-PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱(chēng) | 蘋(píng)果銹果類(lèi)病毒探針?lè)晒舛?/span>RT-PCR試劑盒 | 英文名稱(chēng) | Apple Scar Skin Viroid Probe-based Fluorescent Quantitative RT-PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR4817 |
產(chǎn)品概述
本試劑盒基于探針?lè)晒舛?/span>RT-PCR技術(shù)，專(zhuān)用于蘋(píng)果銹果類(lèi)病毒（Applescarskinviroid, SSV）的定性與定量檢測(cè)。適用于科研用途，具有高靈敏性、高特異性及即開(kāi)即用特點(diǎn)。
產(chǎn)品規(guī)格
規(guī)格：50次/盒（20μL反應(yīng)體系）
保存條件：-20℃避光保存，有效期12個(gè)月；陽(yáng)性對(duì)照需單獨(dú)存放，避免污染。
運(yùn)輸方式：低溫泡沫箱加冰密封運(yùn)輸。
檢測(cè)原理
通過(guò)特異性引物和探針靶向SSV保守序列，在熒光定量PCR儀中實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增信號(hào)，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)實(shí)現(xiàn)病毒RNA的絕對(duì)定量或定性分析。
試劑盒組成
RT-PCR預(yù)混液（含逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq DNA聚合酶、dNTPs等）
陽(yáng)性對(duì)照（無(wú)傳染性DNA片段，濃度1×10^7拷貝/μL）
熒光RT-PCR專(zhuān)用模板稀釋液
陰性對(duì)照（無(wú)RNA酶水）
注：具體組分以實(shí)際貨品說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)，需聯(lián)系供應(yīng)商獲取詳細(xì)清單。
操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備（10倍梯度稀釋?zhuān)?/span>
標(biāo)記6管（6至1號(hào)），每管加45μL稀釋液。
6號(hào)管加入5μL陽(yáng)性對(duì)照（1×10^7拷貝/μL），渦旋混勻，得到1×10^6拷貝/μL標(biāo)準(zhǔn)品。
依次稀釋至1號(hào)管（1×10^1拷貝/μL），每步更換槍頭，冰上保存。
樣本RNA提取
使用兼容的RNA提取試劑盒或柱式法純化樣本RNA，推薦設(shè)置陰性/陽(yáng)性提取對(duì)照（NC/PC）。
qRT-PCR反應(yīng)（20μL體系）
按比例配置反應(yīng)液（預(yù)混液+引物探針+模板）。
加樣：
待測(cè)樣本、陰性對(duì)照（水）、陽(yáng)性對(duì)照（標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)梯度）。
程序設(shè)置：
逆轉(zhuǎn)錄：50℃ 15分鐘
預(yù)變性：95℃ 5分鐘
擴(kuò)增：95℃ 15秒 → 60℃ 1分鐘（40循環(huán)）
數(shù)據(jù)分析
定量檢測(cè)：以標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)log值為橫軸、Ct值為縱軸，計(jì)算樣本濃度。
定性檢測(cè)：
陽(yáng)性：Ct≤36，典型擴(kuò)增曲線(xiàn)；
陰性：Ct≥40；
可疑值（36<Ct<40）需復(fù)測(cè)。
注意事項(xiàng)
分區(qū)操作：樣本處理、試劑配制、擴(kuò)增需在不同區(qū)域進(jìn)行，避免交叉污染。
質(zhì)量控制：每批次實(shí)驗(yàn)需包含陰/陽(yáng)性對(duì)照。
防護(hù)措施：使用一次性耗材，實(shí)驗(yàn)后以10%次氯酸或75%乙醇消毒臺(tái)面。
適用范圍：僅限科研，不適用于臨床診斷。
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