犬血巴爾通體探針法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產品名稱 | 犬血巴爾通體探針法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Bartonella henselae (Canine) Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR4821 |
產品概述
本試劑盒基于探針法熒光定量PCR技術,專用于犬血樣本中巴爾通體(Bartonella spp.)的定性或定量檢測。通過特異性引物和探針靶向巴爾通體保守基因序列,結合內參基因(如GAPDH)實現(xiàn)高靈敏度、高特異性檢測,并支持全流程質控。
檢測原理
靶標設計:針對巴爾通體保守基因(如gltA)設計引物及TaqMan探針,確保覆蓋不同亞型。
熒光信號:探針5'端標記FAM熒光基團,3'端淬滅基團,PCR擴增時釋放熒光信號,通過Ct值定量分析。
內標系統(tǒng):內置GAPDH基因或人工合成內標,避免假陰性。
試劑盒組成
預混反應液:含dNTPs、酶、緩沖液等(凍干微球或液體形式)。
陽性對照:1×10^5 copies/μL 巴爾通體標準品。
陰性對照:無核酸酶水。
核酸提取試劑(可選):兼容柱式或免提方法。
操作步驟
1. 樣本處理
采集與保存:全血/血漿樣本常規(guī)采集,-20℃保存(運輸需泡沫箱加冰)。
核酸提?。和扑]使用配套提取試劑或市售RNA/DNA提取試劑盒。
2. 標準曲線制備
將陽性對照梯度稀釋(10^5至10^0 copies/μL),分裝6管,冰上保存。
每稀釋度重復3次,確保線性范圍(R2≥0.99)。
3. PCR反應體系(20μL)
| 組分 | 體積(μL) |
| 預混反應液 | 15 |
| 模板DNA/RNA | 5 |
程序設置:
95℃ 5min(預變性)→ 95℃ 10s,60℃ 30s(40循環(huán),熒光采集)。
4. 質控要求
陰性對照:Ct≥40或無擴增。
陽性對照:Ct≤36且呈典型S型曲線。
結果判讀
定量分析:以標準曲線log值為橫軸、Ct值為縱軸計算樣本濃度。
定性分析:
陽性:Ct≤36,擴增曲線正常。
可疑:36<Ct<40,需復測。
陰性:Ct≥40或無擴增。
注意事項
分區(qū)操作:樣本處理、試劑配制、擴增需獨立區(qū)域。
防污染措施:使用一次性耗材,實驗后以10%次氯酸或75%酒精清潔臺面。
試劑保存:避光、避免反復凍融,反應液需完全混勻后離心。
交叉反應:已驗證與常見犬貓病原體(如犬細小病毒、貓冠狀病毒等)無交叉。
性能參數(shù)
靈敏度:50 copies/Test。
特異性:100%(臨床驗證262例樣本)。
穩(wěn)定性:-20℃保存12個月。
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關鍵字: 犬血巴爾通體;探針法熒光定量;PCR試劑盒;
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