犬血巴爾通體探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱(chēng) | 犬血巴爾通體探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒 | 英文名稱(chēng) | Bartonella henselae (Canine) Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR4821 |
產(chǎn)品概述
本試劑盒基于探針?lè)晒舛?/span>PCR技術(shù)，專(zhuān)用于犬血樣本中巴爾通體（Bartonella spp.）的定性或定量檢測(cè)。通過(guò)特異性引物和探針靶向巴爾通體保守基因序列，結(jié)合內(nèi)參基因（如GAPDH）實(shí)現(xiàn)高靈敏度、高特異性檢測(cè)，并支持全流程質(zhì)控。
檢測(cè)原理
靶標(biāo)設(shè)計(jì)：針對(duì)巴爾通體保守基因（如gltA）設(shè)計(jì)引物及TaqMan探針，確保覆蓋不同亞型。
熒光信號(hào)：探針5'端標(biāo)記FAM熒光基團(tuán)，3'端淬滅基團(tuán)，PCR擴(kuò)增時(shí)釋放熒光信號(hào)，通過(guò)Ct值定量分析。
內(nèi)標(biāo)系統(tǒng)：內(nèi)置GAPDH基因或人工合成內(nèi)標(biāo)，避免假陰性。
試劑盒組成
預(yù)混反應(yīng)液：含dNTPs、酶、緩沖液等（凍干微球或液體形式）。
陽(yáng)性對(duì)照：1×10^5 copies/μL 巴爾通體標(biāo)準(zhǔn)品。
陰性對(duì)照：無(wú)核酸酶水。
核酸提取試劑（可選）：兼容柱式或免提方法。
操作步驟
1. 樣本處理
采集與保存：全血/血漿樣本常規(guī)采集，-20℃保存（運(yùn)輸需泡沫箱加冰）。
核酸提?。和扑]使用配套提取試劑或市售RNA/DNA提取試劑盒。
2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備
將陽(yáng)性對(duì)照梯度稀釋?zhuān)?/span>10^5至10^0 copies/μL），分裝6管，冰上保存。
每稀釋度重復(fù)3次，確保線性范圍（R2≥0.99）。
3. PCR反應(yīng)體系（20μL）
| 組分 | 體積（μL） |
| 預(yù)混反應(yīng)液 | 15 |
| 模板DNA/RNA | 5 |
程序設(shè)置：
95℃ 5min（預(yù)變性）→ 95℃ 10s，60℃ 30s（40循環(huán)，熒光采集）。
4. 質(zhì)控要求
陰性對(duì)照：Ct≥40或無(wú)擴(kuò)增。
陽(yáng)性對(duì)照：Ct≤36且呈典型S型曲線。
結(jié)果判讀
定量分析：以標(biāo)準(zhǔn)曲線log值為橫軸、Ct值為縱軸計(jì)算樣本濃度。
定性分析：
陽(yáng)性：Ct≤36，擴(kuò)增曲線正常。
可疑：36<Ct<40，需復(fù)測(cè)。
陰性：Ct≥40或無(wú)擴(kuò)增。
注意事項(xiàng)
分區(qū)操作：樣本處理、試劑配制、擴(kuò)增需獨(dú)立區(qū)域。
防污染措施：使用一次性耗材，實(shí)驗(yàn)后以10%次氯酸或75%酒精清潔臺(tái)面。
試劑保存：避光、避免反復(fù)凍融，反應(yīng)液需完全混勻后離心。
交叉反應(yīng)：已驗(yàn)證與常見(jiàn)犬貓病原體（如犬細(xì)小病毒、貓冠狀病毒等）無(wú)交叉。
性能參數(shù)
靈敏度：50 copies/Test。
特異性：100%（臨床驗(yàn)證262例樣本）。
穩(wěn)定性：-20℃保存12個(gè)月。
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