商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 單脫氫抗壞血酸還原酶（MDHAR）測試盒 | 產(chǎn)品貨號 | BH-961112 |
規(guī)格 | 100管/96樣、50管/48樣 | 產(chǎn)品分類 | 輔酶Ⅰ系列 |
測試方法 | 微量法、紫外分光光度法 | 用途 | 僅供科研實驗 |
測定意義與原理
測定意義
單脫氫抗壞血酸還原酶（MDHAR，EC1.6.5.4）是抗壞血酸氧化還原代謝的關鍵酶，主要功能包括：抗氧化防御：催化單脫氫抗壞血酸（MDHA）還原為抗壞血酸（AsA），維持細胞內(nèi)AsA庫穩(wěn)定ROS清除：與抗壞血酸過氧化物酶（APX）協(xié)同作用，清除活性氧（ROS）脅迫響應：參與植物對干旱、高溫、低溫、鹽脅迫等逆境的適應性調(diào)節(jié)疾病關聯(lián)：與氧化應激相關疾病（如心血管疾病、神經(jīng)退行性疾?。┑陌l(fā)生發(fā)展相關
測定原理
MDHAR以NADH為電子供體，催化MDHA還原為AsA： MDHA+NADH+H+→MDHARAsA+NAD+MDHA+NADH+H+MDHARAsA+NAD+ NADH在340nm處有特征吸收峰，NAD+無此吸收，通過監(jiān)測340nm處吸光度下降速率計算MDHAR活性。
自備儀器與試劑
必備儀器
紫外分光光度計/酶標儀（340nm檢測通道）
臺式高速離心機（≥10000rpm）
恒溫水浴鍋（控溫精度±0.5℃）
可調(diào)式移液器（0.5-10μL、10-100μL、100-1000μL）
超聲破碎儀（用于細胞/細菌樣本）
必備耗材
1mL石英比色皿/微量石英比色皿/96孔板
離心管（1.5mL、10mL）
一次性吸頭（無菌無酶）
研缽/組織勻漿器（冰浴專用）
自備試劑
蒸餾水/去離子水
生理鹽水（用于樣本稀釋）
液氮（用于樣本速凍保存）
樣本前處理方法
植物/動物組織樣本新鮮樣本取材后立即液氮速凍，-80℃保存；避免反復凍融稱取0.1g組織，按1:5-10（W/V）比例加入預冷提取液冰浴勻漿（轉(zhuǎn)速1000-1500rpm，時間5-10min）10000rpm 4℃離心10min，取上清液置冰上待測；若活性過高可稀釋1-5倍
細胞/細菌樣本收集對數(shù)生長期細胞（密度1×10^6/mL）或細菌（OD600=0.6-0.8）8000g 4℃離心5min棄上清，用生理鹽水洗滌2次按500萬細胞/細菌加入1mL提取液的比例重懸冰浴超聲破碎（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）10000rpm 4℃離心20min，取上清液置冰上待測
血清/血漿/尿液樣本血清樣本：血液凝固后3000g 4℃離心10min，取上清血漿樣本：加入抗凝劑后3000g 4℃離心10min，取上清尿液樣本：直接取上清，若渾濁需3000g離心5min后取上清以上樣本可直接檢測，無需提取處理
測定操作步驟
比色法操作流程
試劑準備：
試劑一（提取液）：直接使用
試劑二（NADH溶液）：-20℃保存，使用前用蒸餾水稀釋至0.2mmol/L
試劑三（MDHA溶液）：臨用前加入3mL蒸餾水充分溶解
試劑四（反應緩沖液）：臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解
預溫育：
石英比色皿中加入：提取液900μL + 稀釋后NADH溶液20μL + MDHA溶液20μL + 樣本20μL
25℃預溫育5min，記錄初始吸光度A0
反應與測定：
加入反應緩沖液10μL立即混勻，啟動反應
連續(xù)記錄340nm處吸光度變化，讀取30s（A1）和150s（A2）時的吸光度
計算ΔA = A1 - A2
微量法（酶標儀）操作流程96孔板每孔加入：提取液90μL + 稀釋后NADH溶液2μL + MDHA溶液2μL + 樣本2μL25℃預溫育5min，加入反應緩沖液1μL立即混勻酶標儀設置動力學模式，340nm處連續(xù)讀取10個循環(huán)（每10s讀取1次）計算吸光度下降速率（ΔA/min）
酶活力計算方法
單位定義
U/g鮮重：每g組織鮮重每分鐘氧化1μmol NADH的酶量
U/mgprot：每mg蛋白每分鐘氧化1μmol NADH的酶量
U/10?cell：每100萬個細胞每分鐘氧化1μmol NADH的酶量
U/mL：每mL液體樣本每分鐘氧化1μmol NADH的酶量
計算公式
MDHAR活性(U/mgprot)=(ΔA測定管?ΔA空白管)×V反總×106ε×d×Cpr×V樣×TMDHAR活性(U/mgprot)=ε×d×Cpr×V樣×T(ΔA測定管?ΔA空白管)×V反總×106
ΔA：吸光度變化值（A1 - A2）
V反總：反應體系總體積（1.0mL）
ε：NADH摩爾消光系數(shù)（6.22×103 L/(mol·cm)）
d：比色皿光徑（1cm）
Cpr：樣本蛋白濃度（mg/mL）
V樣：測定時加入的樣本體積（0.02mL）
T：反應時間（2min）
簡化公式
組織樣本（蛋白濃度）：MDHAR（U/mgprot）= 0.804 × ΔA ÷ Cpr
組織樣本（鮮重）：MDHAR（U/g鮮重）= 0.804 × ΔA ÷ W
液體樣本：MDHAR（U/mL）= 0.804 × ΔA
細胞/細菌樣本：MDHAR（U/10?cell）= 0.000804 × ΔA ÷ N
注意事項
樣本處理：
MDHAR對溫度敏感，所有操作需在冰浴中進行
樣本需新鮮制備，-80℃保存不超過1個月
避免樣本接觸金屬離子，可用EDTA螯合
試劑使用：
NADH溶液對光敏感，配制后需避光保存，24小時內(nèi)用完
MDHA溶液需臨用現(xiàn)配，避免氧化失效
不同批號試劑不能混用，需重新測定標準曲線
測定過程：
反應溫度需嚴格控制在25℃，避免溫度影響酶活性
若ΔA值大于0.3，需將樣本稀釋后重新測定
空白對照需用提取液替代樣本，扣除非酶反應背景
質(zhì)量控制：
每次實驗需設置陽性對照（已知活性的MDHAR酶）
若結(jié)果偏差較大，需檢查試劑是否變質(zhì)、樣本處理是否正確
公司正在出售的產(chǎn)品
金葡菌腸毒su檢測試劑盒 SE ELISA Kit | B16-F10小鼠黑色素瘤細胞 |
人胎盤蛋白13ELISA試劑盒 | 大鼠原代胰島細胞 |
人泛su蛋白DELISA試劑盒 | 大鼠胰島細胞 |
人泛su連接ELISA試劑盒 | 小鼠心肌成纖維細胞 |
人芳香烴受體ELISA試劑盒 | 95-D [PLA-801D] (人高轉(zhuǎn)移肺癌細胞) (STR鑒定正確) |
人肥大細胞類胰蛋ELISA試劑盒 | 人肺動脈高壓血管內(nèi)皮細胞 |
人肥胖抑制suELISA試劑盒 | 人肺動脈平滑肌細胞 |
人碳SUAN酐2ELISA試劑盒 | 羊睪丸間質(zhì)細胞永生化 |
人肺表面活性物質(zhì)相關蛋白BELISA試劑盒 | 大鼠NK細胞 |
人血清白蛋白ELISA試劑盒 | NCI-H2126 (人肺癌細胞) (STR鑒定正確) |
人肺表面活性物質(zhì)相關蛋白DELISA試劑盒 | 786-O[786-0]人腎透明細胞腺癌細胞 |
人肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子ELISA試劑盒 | 293FT人胚腎細胞專用培養(yǎng)基 |
人肺耐藥蛋白ELISA試劑盒 | 單脫氫抗壞血酸還原酶（MDHAR）測試盒NCI-H1975人肺腺癌細胞 |
人肺特異性X蛋白ELISA試劑盒 | 兔原代尾尖成纖維細胞 |
人分泌成分ELISA試劑盒 | 人喉癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移細胞LLN(STR鑒定正確) |
金葡菌腸毒su檢測試劑盒 SE ELISA Kit | B16-F10小鼠黑色素瘤細胞 |
人胎盤蛋白13ELISA試劑盒 | 大鼠原代胰島細胞 |
人泛su蛋白DELISA試劑盒 | 大鼠胰島細胞 |
人泛su連接ELISA試劑盒 | 小鼠心肌成纖維細胞 |
關鍵字： 單脫氫抗壞血酸還原酶;MDHAR;測試盒;
派瑞曼pyram?是上海博湖生物科技有限公司（Shanghai Bohu Biological Technology Co., Ltd.，China）的產(chǎn)品品牌。
派瑞曼pyram?是一家化學、生化和材料科學等領域的科研用研發(fā)產(chǎn)品的制造商和供應商,我們的產(chǎn)品在相當寬的基礎科學領域得到廣泛的應用。 客戶包括學術(shù)界、工業(yè)界和政府的研究和開發(fā)實驗室以及制藥、生物技術(shù)、化工/石化行業(yè)等具商業(yè)規(guī)模的企業(yè)。
派瑞曼pyram?除包括化學、分析化學、生命科學、材料科學和病理科學產(chǎn)品。質(zhì)量是所有產(chǎn)品和服務最關鍵的組成部分,我們通過質(zhì)量和實力贏得客戶的信賴。產(chǎn)品的質(zhì)量是企業(yè)的生命。
公司秉承"專注品質(zhì)、誠信為本、服務至上、合作共贏"的企業(yè)文化積極參與生物領域的技術(shù)創(chuàng)新和技術(shù)服務,力求為我國科研事業(yè)更好的,更專業(yè)的服務！