檸檬酸（CA）含量測(cè)試盒

測(cè)定意義與原理

測(cè)定意義

CA又稱(chēng)枸櫞酸，廣泛存在于各種生物胞質(zhì)中，是生物體內(nèi)重要的有機(jī)酸，是三羧酸循環(huán)第一步反應(yīng)的產(chǎn)物。CA是重要的食品風(fēng)味物質(zhì)，在動(dòng)植物體中參與三羧酸循環(huán)，其含量測(cè)定具有重要的臨床和科研價(jià)值：食品檢測(cè)：檢測(cè)食品中檸檬酸含量，判斷食品品質(zhì)和新鮮度臨床診斷：診斷和監(jiān)測(cè)肝病、腎病、糖尿病等疾病工業(yè)應(yīng)用：監(jiān)測(cè)發(fā)酵過(guò)程中檸檬酸產(chǎn)量，優(yōu)化生產(chǎn)工藝環(huán)境監(jiān)測(cè)：評(píng)估土壤和水體污染程度生物學(xué)研究：了解動(dòng)植物代謝途徑和生理機(jī)制

測(cè)定原理

酸性條件下，檸檬酸還原Cr 6+ 生成Cr 3+ ，Cr3+在545nm處有特征吸收峰；通過(guò)測(cè)定545nm吸光值的增加，即可計(jì)算出樣品中檸檬酸含量。反應(yīng)式如下： 檸檬酸+Cr6+→酸性條件Cr3++氧化產(chǎn)物檸檬酸+Cr6+酸性條件Cr3++氧化產(chǎn)物

試劑盒組成

組分 規(guī)格 作用說(shuō)明

試劑一 液體×1瓶 含緩沖液，用于提供適宜的反應(yīng)pH環(huán)境

試劑二 液體×1瓶 含Cr 6+ 溶液，反應(yīng)試劑

試劑三 液體×1支 含酸化劑，用于調(diào)節(jié)反應(yīng)體系pH值

試劑四 粉劑×1瓶 含顯色劑，用于檢測(cè)Cr 3+ ，需臨用前配制

標(biāo)準(zhǔn)品 液體×1支 含250μmol/L檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)液，用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

自備儀器與試劑

必備儀器

可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、研缽、冰和蒸餾水

必備耗材

離心管（1.5mL/10mL）、一次性吸頭、研缽/組織勻漿器

自備試劑：蒸餾水/去離子水、生理鹽水、三氯乙酸

樣本前處理方法

動(dòng)植物組織樣本取樣：稱(chēng)取約0.1g組織，用生理鹽水洗凈，濾紙吸干，剪碎勻漿：加入1mL蒸餾水，進(jìn)行冰浴勻漿離心：8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)蛋白濃度測(cè)定：另取組織測(cè)定蛋白濃度，可用考馬斯亮藍(lán)法或BCA法

細(xì)胞樣本收集：收集500萬(wàn)細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清破碎：加入1mL蒸餾水，超聲波破碎細(xì)胞（冰浴，功率20%或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）離心：8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)

血清/血漿樣本

血清/血漿樣本可直接檢測(cè)；若濃度過(guò)高，用蒸餾水稀釋10-20倍

測(cè)定操作步驟

儀器預(yù)熱：分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至545nm，蒸餾水調(diào)零試劑配制：臨用前，取試劑四粉劑×1瓶，加入5mL試劑一，充分溶解，制成工作液標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制：

將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成0、50、100、150、200、250μmol/L系列濃度

取100μL標(biāo)準(zhǔn)溶液于比色管中，加入100μL試劑二、100μL試劑三，混勻，37℃水浴30min

加入100μL工作液，混勻，室溫反應(yīng)15min，測(cè)定545nm吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品測(cè)定：

取100μL樣本溶液于比色管中，加入100μL試劑二、100μL試劑三，混勻，37℃水浴30min

加入100μL工作液，混勻，室溫反應(yīng)15min

測(cè)定545nm吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣本中檸檬酸含量

結(jié)果計(jì)算方法

單位定義

μmol/g 鮮重：每克鮮重樣本中檸檬酸的含量

μmol/L：每升樣本中檸檬酸的含量

μmol/mg 蛋白：每毫克組織蛋白中檸檬酸的含量

計(jì)算公式

檸檬酸含量(μmol/g鮮重)=C×V總W×V樣×1000檸檬酸含量(μmol/g鮮重)=W×V樣C×V總×1000

C：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出的樣本中檸檬酸濃度（μmol/L）

V總：樣本提取液總體積（mL）

W：樣本質(zhì)量（g）

V樣：測(cè)定時(shí)取用樣本體積（mL）

性能指標(biāo)

指標(biāo) 分光光度法/比色法

線(xiàn)性范圍 0~250μmol/L

最低檢測(cè)限 ≤1μmol/L

回收率 90%~110%

批內(nèi)精密度 CV≤2.1%

批間精密度 CV≤5.0%

穩(wěn)定性 2-8℃保存12個(gè)月

注意事項(xiàng)

樣本處理：

樣本需新鮮制備，避免檸檬酸降解；-20℃可保存3個(gè)月

組織樣本需冰浴勻漿，避免酶失活

液體樣本需避免溶血和細(xì)菌污染

試劑使用：

試劑四需臨用前配制，避免氧化失效

不同批號(hào)試劑不能混用，需重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

標(biāo)準(zhǔn)品需4℃保存，避免反復(fù)凍融

測(cè)定過(guò)程：

反應(yīng)溫度需嚴(yán)格控制在37℃

加入試劑后需充分混勻，確保反應(yīng)完全

若吸光度值超出線(xiàn)性范圍，需稀釋樣本后重新測(cè)定

質(zhì)量控制：

每次實(shí)驗(yàn)需設(shè)置空白對(duì)照和質(zhì)控樣本

定期校準(zhǔn)儀器，確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性

若結(jié)果偏差較大，需檢查試劑是否變質(zhì)或樣本處理是否正確

公司正在出售的產(chǎn)品