乳酸含量（LA）測試盒

測定意義與原理

測定意義

乳酸是生物體代謝過程中重要的中間產物，與糖代謝、脂類代謝、蛋白質代謝及細胞內能量代謝密切相關，乳酸含量是評估糖元代謝和有氧代謝的重要指標。其含量的異常升高與多種疾病如糖尿病和酸毒癥等疾病有密切關系。在劇烈運動和肌肉抽搐時，血液乳酸濃度會顯著升高。在膿毒血癥、呼吸衰竭、糖尿病和腎衰竭等疾病條件下，血液乳酸濃度也會顯著升高。

測定原理

乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成丙酮酸，同時使NAD+還原生成NADH和H+，H+傳遞給PMS生成的PMSH2還原INT生成紅色物質，在530nm處有特征吸收峰。反應式如下： 乳酸+NAD+→LDH丙酮酸+NADH+H+乳酸+NAD+LDH丙酮酸+NADH+H+ NADH+PMS→NAD++PMSH2NADH+PMS→NAD++PMSH2 PMSH2+INT→PMS+INT還原態(tài)PMSH2+INT→PMS+INT還原態(tài)

試劑盒組成

組分 規(guī)格 作用說明

提取液 液體50mL×1瓶 用于提取樣本中的乳酸

試劑一 液體6mL×1瓶 含緩沖液，用于提供適宜的反應pH環(huán)境

試劑二 液體0.06mL×1支 含酶貯備液，反應輔助因子

試劑三 粉劑×1支 含穩(wěn)定劑，用于穩(wěn)定反應體系

試劑四 粉劑×1瓶 含顯色劑，用于檢測反應產物

試劑五 液體1mL×1支 含標準品（10mmol/L），用于建立標準曲線

自備儀器與試劑

必備儀器

比色法：可見分光光度計/酶標儀（530nm檢測通道）、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水

ELISA法：酶標儀（450nm檢測通道）、96孔板、37℃恒溫箱、洗板機

必備耗材

離心管（1.5mL/10mL）、一次性吸頭、研缽/組織勻漿器

自備試劑：蒸餾水/去離子水、生理鹽水、三氯乙酸

樣本前處理方法

動植物組織樣本取樣：準確稱取0.1g組織，用生理鹽水洗凈表面雜質，用濾紙吸干勻漿：加入1mL提取液，用冰浴勻漿器或研缽勻漿離心：8000g，4℃離心10min，棄沉淀，保留上清液檢測：上清液用于乳酸含量測定

細胞樣本收集：收集500萬細胞到離心管內，離心后棄上清破碎：加入1mL提取液，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20%或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）離心：8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測

血清/血漿樣本

血清/血漿樣本可直接檢測；若濃度過高，用提取液稀釋10-20倍

測定操作步驟

比色法操作儀器預熱：分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長到530nm，用蒸餾水調零試劑配制：

顯色液：臨用前根據用量按照提取液(V):試劑三(V):試劑四(V):試劑五(m)=1(mL):0.3(mL):3(mL):15(mg)的比例充分混勻。注意：現配現用，用多少配多少，在棕色瓶中配制，試劑盒中帶有5個棕色空瓶標準曲線繪制：

將標準品稀釋成0、1、2、3、4、5mmol/L系列濃度

取100μL標準溶液于比色管中，加入900μL顯色液，混勻，37℃水浴30min

測定530nm吸光度，繪制標準曲線樣品測定：

取100μL樣本溶液于比色管中，加入900μL顯色液，混勻，37℃水浴30min

測定530nm吸光度，根據標準曲線計算樣本中乳酸含量

ELISA法操作試劑準備：將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出，室溫平衡15-30分鐘；將20×洗滌緩沖液用蒸餾水20倍稀釋后備用加樣：

從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃

設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加溫育：除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入HRP標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min洗滌：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）顯色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min終止：每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值結果計算：繪制標準曲線，按曲線方程計算樣本濃度

結果計算方法

單位定義

mmol/g 鮮重：每克鮮重樣本中乳酸的含量

mmol/L：每升樣本中乳酸的含量

比色法計算公式

乳酸含量(mmol/g鮮重)=C×V總W×V樣×1000乳酸含量(mmol/g鮮重)=W×V樣C×V總×1000

C：根據標準曲線計算出的樣本中乳酸濃度（mmol/L）

V總：樣本提取液總體積（mL）

W：樣本質量（g）

V樣：測定時取用樣本體積（mL）

ELISA法計算公式

乳酸含量(mmol/L)=樣本OD值?空白OD值標準品OD值?空白OD值×標準品濃度×稀釋倍數乳酸含量(mmol/L)=標準品OD值?空白OD值樣本OD值?空白OD值×標準品濃度×稀釋倍數

性能指標

指標 比色法 ELISA法

線性范圍 0~5mmol/L 0~10mmol/L

最低檢測限 ≤0.1mmol/L ≤0.1mmol/L

回收率 90%~110% 90%~110%

批內精密度 CV≤5.0% CV≤5.0%

批間精密度 CV≤8.0% CV≤8.0%

穩(wěn)定性 2-8℃保存6-12個月 2-8℃保存6-12個月

注意事項

樣本處理：

樣本需新鮮制備，避免乳酸降解；-20℃可保存3個月

組織樣本需冰浴勻漿，避免酶失活

液體樣本需避免溶血和細菌污染

試劑使用：

試劑四需臨用前配制，避免氧化失效

不同批號試劑不能混用，需重新繪制標準曲線

標準品需4℃保存，避免反復凍融

測定過程：

反應溫度需嚴格控制在37℃

加入試劑后需充分混勻，確保反應完全

若吸光度值超出線性范圍，需稀釋樣本后重新測定

質量控制：

每次實驗需設置空白對照和質控樣本

定期校準儀器，確保檢測結果準確性

若結果偏差較大，需檢查試劑是否變質或樣本處理是否正確

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