商品屬性
產品名稱 | 尿酸(UA)含量測試盒 | 產品貨號 | BH-961171 |
規(guī)格 | 100管/96樣、50管/48樣 | 產品分類 | 氧化與抗氧化系列 |
測試方法 | 微量法、可見分光光度法 | 用途 | 僅供科研實驗 |
測定意義與原理
測定意義
尿酸（Uric Acid，UA）是嘌呤代謝的終產物，其含量測定在臨床診斷和生物學研究中具有重要意義：臨床診斷：
高尿酸血癥：血尿酸水平升高是痛風的主要病因和直接診斷指標
腎功能評估：尿酸排泄障礙是腎功能不全的早期表現(xiàn)
代謝綜合征：與高血壓、糖尿病、高血脂等代謝性疾病密切相關
血液病診斷：白血病、真性紅細胞增多癥等嘌呤代謝亢進疾病會導致尿酸升高生物學研究：
抗氧化作用：尿酸是人體內重要的內源性抗氧化劑，可清除自由基
藥物篩選：評估降尿酸藥物的療效和作用機制
環(huán)境毒理：監(jiān)測污染物對生物體嘌呤代謝的影響
測定原理
采用尿酸氧化酶-過氧化物酶偶聯(lián)法（PAP法），反應過程如下： 尿酸+O2+H2O→尿酸氧化酶尿囊素+H2O2尿酸+O2+H2O尿酸氧化酶尿囊素+H2O2 2H2O2+4-AAP+苯酚→過氧化物酶紅色醌亞胺+4H2O2H2O2+4-AAP+苯酚過氧化物酶紅色醌亞胺+4H2O 在500nm波長下，紅色醌亞胺的吸光度與尿酸含量成正比，通過比色法測定尿酸濃度。
試劑盒組成
組分 規(guī)格 作用說明
試劑一 液體40mL×1瓶 含緩沖液、4-氨基安替比林（4-AAP）、苯酚，參與顯色反應
試劑二 液體10mL×1瓶 含尿酸氧化酶、過氧化物酶，催化尿酸氧化與顯色反應
試劑三 液體1mL×1支 含6mmol/L尿酸標準品，用于建立標準曲線
提取液 液體100mL×1瓶 含0.1mol/L磷酸鹽緩沖液，pH7.4，用于細胞/組織樣本提取
自備儀器與試劑
必備儀器
分光光度法：可見分光光度計（500nm檢測通道）、1mL玻璃比色皿
酶標儀法：酶標儀（500nm檢測通道）、96孔板
HPLC法：高效液相色譜儀、紫外檢測器（293nm檢測通道）
通用：低溫離心機（≥8000g）、恒溫水浴鍋、可調式移液器
必備耗材
離心管（1.5mL/10mL）、一次性吸頭、研缽/組織勻漿器
自備試劑：蒸餾水/去離子水、生理鹽水、抗凝劑（肝素/EDTA）
樣本前處理方法
血清/血漿樣本血清樣本：靜脈采血后室溫靜置30min，3000g 4℃離心10min，取上清液待測血漿樣本：用肝素/EDTA抗凝，3000g 4℃離心10min，取上清液待測樣本需避免溶血，溶血會導致結果偏高；樣本-20℃可保存1個月
尿液樣本取新鮮尿液，3000g 4℃離心10min，取上清液待測若尿酸濃度過高，可用生理鹽水稀釋1-10倍測定樣本可-20℃保存1個月，解凍后離心取上清
細胞/組織樣本細胞樣本：收集500萬細胞，8000g 4℃離心5min棄上清，加入1mL提取液冰浴超聲破碎組織樣本：按質量(g):提取液(mL)=1:5~10比例冰浴勻漿8000g 4℃離心10min，取上清液置冰上待測樣本-80℃可保存3個月，避免反復凍融
測定操作步驟
酶法測定（常規(guī)法）
工作液配制：
將試劑盒所有組分平衡至室溫（25℃）
工作液：取試劑一8mL + 試劑二2mL，充分混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用
標準品稀釋：用生理鹽水將6mmol/L尿酸標準品稀釋成0、1.2、2.4、3.6、4.8、6.0mmol/L系列濃度
標準曲線建立：
取比色管，加入標準品溶液0.2mL + 工作液2.0mL，混勻
37℃水浴反應10min，500nm波長下測定吸光度
以尿酸濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線
樣本測定：
測定管：取比色管，加入樣本0.2mL + 工作液2.0mL，混勻
空白管：取比色管，加入生理鹽水0.2mL + 工作液2.0mL，混勻
37℃水浴反應10min，測定500nm波長下吸光度（A樣、A空）
酶法測定（微量法）取96孔板，加入樣本20μL + 工作液200μL，混勻37℃恒溫孵育10min，酶標儀500nm波長下測定吸光度空白孔：加入生理鹽水20μL + 工作液200μL，同樣處理
結果計算方法
單位定義
mmol/L：血清/血漿中尿酸的摩爾濃度
mmol/g鮮重：組織樣本中尿酸的含量
μmol/mgprot：每毫克蛋白中尿酸的含量
計算公式
尿酸濃度(mmol/L)=(A樣?A空)×C標(A標?A空標)尿酸濃度(mmol/L)=(A標?A空標)(A樣?A空)×C標
A樣-A空：樣本扣除空白后的吸光度值
C標：標準品濃度（mmol/L）
A標-A空標：標準品扣除空白后的吸光度值
簡化公式
按體積計算：尿酸（mmol/L）= C標 × (A樣 - A空)/(A標 - A空標)
按鮮重計算：尿酸（mmol/g鮮重）= C標 × (A樣 - A空)/(A標 - A空標) × V總/W
性能指標
指標 要求
線性范圍 0~6mmol/L，線性相關系數r≥0.995
最低檢測限 ≤0.01mmol/L
回收率 95%~105%
批內精密度 CV≤3.0%
批間精密度 CV≤5.0%
穩(wěn)定性 2-8℃保存12個月，活性保留≥90%
注意事項
樣本處理：
樣本需避免溶血，紅細胞內含有大量尿酸酶抑制劑，會導致結果升高
樣本采集后需盡快測定，避免尿酸被氧化或降解
尿液樣本需留取24小時尿或晨尿中段尿，避免污染
試劑使用：
酶試劑需避免反復凍融，解凍后2-8℃可保存1個月
工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用，室溫下可穩(wěn)定8小時
標準品需避免光照，防止降解
測定過程：
反應時間和溫度需嚴格控制，避免酶活性受影響
若吸光度值超出線性范圍，需稀釋樣本后重新測定
膽紅素、維生素C等還原性物質會干擾測定，需使用抗干擾試劑或校正方法
質量控制：
每次實驗需設置空白對照和質控樣本
定期校準儀器，確保檢測結果準確性
若結果偏差較大，需檢查試劑是否變質或樣本處理是否正確
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關鍵字： 尿酸;UA;測試盒;
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