果糖1,6二磷酸(FDP)測試盒

測定意義與原理

測定意義

FDP是機體內(nèi)的高能代謝物和代謝調(diào)控劑，是糖酵解途徑的重要中間體，廣泛存在于動植物和微生物體內(nèi)，能影響細胞內(nèi)鉀離子的濃度，改善葡萄糖和其他能量底物的代謝，促進組織氧的釋放，廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)藥制劑。其活性測定具有重要的臨床和科研價值：臨床診斷：診斷和監(jiān)測糖尿病、心血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病等代謝疾病疾病監(jiān)測：評估細胞能量代謝狀態(tài)、組織損傷程度和治療效果生物學研究：了解糖酵解途徑、細胞凋亡和細胞增殖機制藥物研發(fā)：篩選糖酵解途徑抑制劑，用于治療癌癥和代謝疾病植物學研究：研究植物光合作用、碳代謝途徑、抗逆性機制

測定原理

醛縮酶催化果糖1,6-二磷酸降解，產(chǎn)物與DNPH縮合成紫紅色物質(zhì)，在540nm有特征吸收峰。反應(yīng)式如下： FDP→醛縮酶磷酸二羥丙酮+甘油醛-3-磷酸FDP醛縮酶磷酸二羥丙酮+甘油醛-3-磷酸 磷酸二羥丙酮+甘油醛-3-磷酸+DNPH→紫紅色化合物磷酸二羥丙酮+甘油醛-3-磷酸+DNPH→紫紅色化合物

試劑盒組成

紫外分光光度法/微量法試劑盒

組分 規(guī)格 作用說明

試劑一 液體60mL×1瓶 含提取液，用于提取樣本中的FDP

試劑二 液體47.5mL×1瓶 含反應(yīng)緩沖液，用于提供適宜的反應(yīng)pH環(huán)境

試劑三 粉劑×1瓶 含底物液，反應(yīng)底物

試劑四 粉劑×1瓶 含輔助底物，反應(yīng)輔助因子

標準品 1mL×1支 含F(xiàn)DP標準液，用于建立標準曲線

ELISA法試劑盒

組分 規(guī)格 作用說明

包被板 96孔×1塊 預包被抗FDP單克隆抗體

酶標抗體 液體6mL×1瓶 含HRP標記抗FDP抗體

標準品 液體1mL×6管 含0.156-10ng/mL FDP標準品

樣本稀釋液 10mL×1瓶 用于稀釋樣本和標準品

顯色劑A液 6mL×1瓶 含過氧化氫溶液

顯色劑B液 6mL×1瓶 含TMB溶液

終止液 6mL×1瓶 含硫酸溶液

20倍濃縮洗滌液 20mL×1瓶 用于洗滌酶標板

自備儀器與試劑

必備儀器

紫外分光光度法/微量法：紫外分光光度計/酶標儀/可見分光光度計、1mL石英比色皿/96孔板/1mL玻璃比色皿、臺式離心機、恒溫水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽、電子天平

ELISA法：酶標儀、洗板機、96孔板、37℃恒溫箱、可調(diào)式移液器

必備耗材

離心管（1.5mL/10mL）、一次性吸頭、研缽/組織勻漿器、超聲破碎儀

自備試劑：蒸餾水/去離子水、生理鹽水

樣本前處理方法

動植物組織樣本取樣：按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）加入試劑一，冰浴勻漿離心：4℃，10000g離心10min，取上清，置冰上待測

細胞/微生物樣本收集：收集500萬細胞或微生物到離心管內(nèi)，離心后棄上清破碎：按照細菌或細胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）離心：4℃，10000g離心10min，取上清，置冰上待測

血清/血漿樣本

血清(漿)樣品：直接檢測

測定操作步驟

紫外分光光度法/微量法操作儀器預熱：分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長到540nm，蒸餾水調(diào)零試劑配制：

工作液：將試劑二全部倒入試劑一瓶中，37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）預熱10分鐘

試劑三稀釋：500μL試劑三加500μL蒸餾水，混勻后-20℃保存?zhèn)溆脴颖緶y定：

試劑名稱(μL) 空白管 測定管

蒸餾水/樣本 100 100

工作液 800 800

試劑三 100 100

混勻后立即記錄540nm處反應(yīng)5min時的吸光值A(chǔ)1和10min時的吸光值A(chǔ)2，計算ΔA=A1-A2

ELISA法操作試劑準備：將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出，室溫平衡15-30分鐘；將20×洗滌緩沖液用蒸餾水20倍稀釋后備用加樣：

從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃

設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加溫育：除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入HRP標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min洗滌：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）顯色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min終止：每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值結(jié)果計算：繪制標準曲線，按曲線方程計算樣本濃度

結(jié)果計算方法

單位定義

U/mg prot：每毫克組織蛋白每分鐘生成1nmol紫紅色化合物的酶量

U/g 鮮重：每克組織每分鐘生成1nmol紫紅色化合物的酶量

U/L：每升樣本每分鐘生成1nmol紫紅色化合物的酶量

紫外分光光度法/微量法計算公式

FDP活性(U/mg prot)=(ΔA樣本?ΔA空白)×V總Cpr×V樣×ε×d×T×109FDP活性(U/mg prot)=Cpr×V樣×ε×d×T(ΔA樣本?ΔA空白)×V總×109

ΔA樣本：樣本管吸光度變化值

ΔA空白：空白管吸光度變化值

V總：反應(yīng)體系總體積（L）

Cpr：樣本蛋白濃度（mg/mL）

V樣：樣本體積（L）

ε：NADH摩爾消光系數(shù)（6.22×103 L/mol/cm）

d：比色皿光徑（cm）

T：反應(yīng)時間（min）

ELISA法計算公式

FDP含量(ng/mL)=樣本OD值?空白OD值標準品OD值?空白OD值×標準品濃度×稀釋倍數(shù)FDP含量(ng/mL)=標準品OD值?空白OD值樣本OD值?空白OD值×標準品濃度×稀釋倍數(shù)

性能指標

指標 紫外分光光度法/微量法/ELISA法

線性范圍 0~40U/L

最低檢測限 ≤0.1U/L

回收率 90%~110%

批內(nèi)精密度 CV≤3.2%

批間精密度 CV≤5.3%

穩(wěn)定性 2-8℃保存6-12個月

注意事項

樣本處理：

樣本需新鮮制備，避免FDP失活；-20℃可保存3個月

組織樣本需冰浴勻漿，避免酶失活

超聲波破碎時需控制功率和時間，避免樣本降解

試劑使用：

試劑需臨用前配制，避免氧化失效

不同批號試劑不能混用，需重新繪制標準曲線

標準品需4℃保存，避免反復凍融

測定過程：

反應(yīng)溫度需嚴格控制在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）

加入樣品啟動反應(yīng)后3秒內(nèi)即刻比色測定

若吸光度值超出線性范圍，需稀釋樣本后重新測定

質(zhì)量控制：

每次實驗需設(shè)置空白對照和質(zhì)控樣本

定期校準儀器，確保檢測結(jié)果準確性

若結(jié)果偏差較大，需檢查試劑是否變質(zhì)或樣本處理是否正確

公司正在出售的產(chǎn)品