商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 丙二醛（MDA）測試盒 | 產(chǎn)品貨號 | BH-961153 |
規(guī)格 | 100管/96樣、50管/48樣 | 產(chǎn)品分類 | 氧化與抗氧化系列 |
測試方法 | 微量法、可見分光光度法 | 用途 | 僅供科研實驗 |
測定意義與原理
測定意義
丙二醛（MDA）是膜脂過氧化的主要產(chǎn)物，是衡量氧化損傷程度的重要指標(biāo)，其主要意義包括：氧化應(yīng)激指標(biāo)：直接反映細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化程度疾病診斷：與多種疾病相關(guān)，如心血管疾病、神經(jīng)退行性疾病、糖尿病、肝臟疾病等環(huán)境脅迫：作為植物對干旱、鹽漬、重金屬等逆境響應(yīng)的生物標(biāo)志物衰老研究：可作為衰老程度的評價指標(biāo)，反映組織氧化損傷水平
測定原理
MDA與硫代巴比妥酸（TBA）在酸性條件下加熱反應(yīng)，生成粉紅色的MDA-TBA縮合物： MDA+2TBA→H+MDA-TBA縮合物MDA+2TBAH+MDA-TBA縮合物 該縮合物在532nm處有最大吸收峰，吸光度與MDA濃度成正比。
試劑盒組成
組分 規(guī)格 作用說明
試劑一 25mL×1瓶/50mL×1瓶 含10%三氯乙酸（TCA）溶液，用于樣本沉淀和提取
試劑二 10mL×1瓶/20mL×1瓶 含0.67%硫代巴比妥酸（TBA）溶液，顯色劑
試劑三 1mL×1支/2mL×1支 含10mmol/L MDA標(biāo)準(zhǔn)品，用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線
提取液 100mL×1瓶 含0.1mol/L磷酸緩沖液，pH7.4，用于樣本提取
自備儀器與試劑
必備儀器
可見分光光度計/酶標(biāo)儀（532nm檢測通道）
恒溫水浴鍋（控溫精度±0.5℃）
臺式高速離心機（≥8000g）
可調(diào)式移液器（0.5-10μL、10-100μL、100-1000μL）
研缽/組織勻漿器（冰浴專用）
必備耗材
1mL玻璃比色皿/96孔板
離心管（1.5mL、10mL）
一次性無菌吸頭
手術(shù)剪/鑷子（用于組織樣本處理）
自備試劑
蒸餾水/去離子水
生理鹽水（0.85% NaCl）
抗凝劑（肝素/EDTA，僅用于血漿樣本）
樣本前處理方法
動植物組織樣本取新鮮組織，用生理鹽水沖洗干凈，濾紙吸干水分稱取約0.1g組織，加入1mL預(yù)冷提取液，冰浴勻漿8000g 4℃離心10min，取上清液置冰上待測若MDA濃度過高，可用提取液稀釋1-5倍后測定
細(xì)菌/細(xì)胞樣本收集對數(shù)生長期細(xì)菌/細(xì)胞，8000g 4℃離心5min棄上清按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(10?個):提取液體積(mL)=500~1000:1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率20%或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）8000g 4℃離心10min，取上清液置冰上待測
液體樣本（血清/血漿/尿液/腦脊液等）血清樣本：血液凝固后3000g 4℃離心10min，取血清上清血漿樣本：加入抗凝劑（肝素/EDTA）后3000g 4℃離心10min，取上清尿液/腦脊液：新鮮樣本3000g 4℃離心10min，取上清樣本可直接檢測，無需提取處理；濃度過高時可用生理鹽水稀釋
測定操作步驟
分光光度法操作
試劑準(zhǔn)備：
試劑一：液體25mL×1瓶，4℃保存
試劑二：液體10mL×1瓶，-20℃保存，用時加10mL蒸餾水溶解
試劑三：液體1mL×1支，-20℃保存，用時加9mL蒸餾水溶解
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：將試劑三（10mmol/L MDA標(biāo)準(zhǔn)品）用蒸餾水稀釋成0、1、2、3、4、5μmol/L的標(biāo)準(zhǔn)系列
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：
取比色管，依次加入標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.5mL + 試劑二0.5mL
混勻，沸水浴中加熱15min，立即冰浴冷卻
8000g離心10min，取上清液在532nm波長下測定吸光度
以MDA濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
樣本測定：
分光光度計預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到532nm，蒸餾水調(diào)零
空白管：取比色管，依次加入提取液0.5mL + 試劑二0.5mL
測定管：取比色管，依次加入樣本0.5mL + 試劑二0.5mL
混勻，沸水浴中加熱15min，立即冰浴冷卻
8000g離心10min，取上清液測定吸光度（A空、A樣）
微量法（酶標(biāo)儀）操作96孔板每孔加入：樣本50μL + 試劑二50μL混勻，沸水浴中加熱15min，立即冰浴冷卻3000g離心5min，取上清液在532nm波長下測定吸光度同時繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算MDA濃度
含量計算方法
計算公式
MDA濃度(nmol/g鮮重)=C×V總×D×1000WMDA濃度(nmol/g鮮重)=WC×V總×D×1000 MDA濃度(nmol/mL)=C×1000×DMDA濃度(nmol/mL)=C×1000×D
C：從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的MDA濃度（μmol/L）
V總：樣本提取液總體積（mL）
D：樣本稀釋倍數(shù)（未稀釋則為1）
W：組織鮮重（g）
簡化公式
組織樣本：MDA（nmol/g鮮重）= (A樣 - A空) × 100 ÷ W
液體樣本：MDA（nmol/mL）= (A樣 - A空) × 100
性能指標(biāo)
指標(biāo) 要求
線性范圍 0~5μmol/L，線性相關(guān)系數(shù)r≥0.995
最低檢測限 ≤0.1μmol/L
回收率 90%~110%
批內(nèi)精密度 CV≤5.0%
批間精密度 CV≤8.0%
穩(wěn)定性 4℃保存12個月，活性保留≥90%
注意事項
樣本處理：
樣本需新鮮制備，避免MDA分解；-80℃可保存1個月
勻漿與超聲破碎需在冰浴中進(jìn)行，控制溫度在0-4℃
樣本需避免氧化，處理過程中盡量減少與空氣接觸
試劑使用：
TBA溶液對光敏感，配制后需避光保存
標(biāo)準(zhǔn)品需現(xiàn)配現(xiàn)用，避免MDA分解
不同批號試劑不能混用，需重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
測定過程：
沸水浴時間需嚴(yán)格控制在15min，避免顯色過度
若吸光度值超出線性范圍，需稀釋樣本后重新測定
每個樣本需設(shè)置平行實驗，結(jié)果取平均值
質(zhì)量控制：
每次實驗需設(shè)置空白對照和質(zhì)控樣本
定期校準(zhǔn)儀器，確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確性
若結(jié)果偏差較大，需檢查試劑是否變質(zhì)或樣本處理是否正確
公司正在出售的產(chǎn)品
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關(guān)鍵字： 丙二醛;MDA;測試盒;
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