商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 總抗氧化能力（DPPH法）測(cè)試盒 | 產(chǎn)品貨號(hào) | BH-961165 |
規(guī)格 | 100管/96樣、50管/48樣 | 產(chǎn)品分類 | 氧化與抗氧化系列 |
測(cè)試方法 | 微量法、可見分光光度法 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
測(cè)定意義與原理
測(cè)定意義
總抗氧化能力是生物體系中所有抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶總活性的綜合體現(xiàn)，其主要意義包括：氧化應(yīng)激評(píng)估：直接反映體內(nèi)氧化還原平衡狀態(tài)，是氧化應(yīng)激的重要指標(biāo)疾病診斷：與心血管疾病、糖尿病、神經(jīng)退行性疾病、癌癥等密切相關(guān)營(yíng)養(yǎng)評(píng)估：評(píng)價(jià)食品、保健品、中草藥等的抗氧化活性藥物篩選：作為抗氧化藥物研發(fā)和療效評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)環(huán)境監(jiān)測(cè)：評(píng)估生物對(duì)環(huán)境污染、輻射等脅迫的響應(yīng)
測(cè)定原理
采用DPPH自由基清除法，DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）是一種穩(wěn)定的氮中心自由基，在515nm波長(zhǎng)下有強(qiáng)吸收，其醇溶液呈深紫色。當(dāng)加入抗氧化劑時(shí)，DPPH自由基被還原成無(wú)色的DPPH-H，溶液顏色變淺，515nm處吸光度下降，吸光度變化與自由基被清除的程度成正比，以此量化樣本的總抗氧化能力。
試劑盒組成
組分 規(guī)格 作用說(shuō)明
試劑一 液體40mL×1瓶 含0.1mM DPPH的甲醇溶液，反應(yīng)底物，與抗氧化劑反應(yīng)生成無(wú)色化合物
試劑二 液體80mL×1瓶 含0.1mol/L磷酸緩沖液，pH7.4，用于樣本提取
試劑三 液體1mL×1支 含100μmol/L Trolox標(biāo)準(zhǔn)品，用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線
說(shuō)明書 1份 包含詳細(xì)實(shí)驗(yàn)步驟、計(jì)算方法和注意事項(xiàng)
自備儀器與試劑
必備儀器
分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀（515nm檢測(cè)通道）
低溫離心機(jī)（≥10000g）
恒溫水浴鍋（控溫精度±0.5℃）
可調(diào)式移液器（0.5-10μL、10-100μL、100-1000μL）
研缽/組織勻漿器（冰浴專用）
沸水浴裝置（可選，用于植物樣本前處理）
必備耗材
1mL玻璃/石英比色皿/96孔板
離心管（1.5mL、10mL）
一次性無(wú)菌吸頭
手術(shù)剪/鑷子（用于組織樣本處理）
自備試劑
蒸餾水/去離子水
生理鹽水（0.85% NaCl）
甲醇/無(wú)水乙醇（用于配制DPPH溶液）
抗凝劑（肝素/檸檬酸鈉，僅用于血漿樣本）
樣本前處理方法
血漿/血清樣本血漿樣本：靜脈采血后立即加入肝素或檸檬酸鈉抗凝（避免使用EDTA），5000g 4℃離心10min，取上清液置冰上待測(cè)血清樣本：靜脈采血室溫靜置30min，血液凝固后5000g 4℃離心10min，取上清液置冰上待測(cè)樣本可直接檢測(cè)，活性過(guò)高時(shí)用試劑二稀釋1-5倍
尿液/唾液樣本取新鮮尿液或唾液，5000g 4℃離心10min去除沉淀取上清液置冰上待測(cè)，可直接檢測(cè)或根據(jù)需要用試劑二稀釋
動(dòng)植物組織樣本取新鮮組織，用生理鹽水沖洗干凈，濾紙吸干水分稱取約0.1g組織，加入1mL預(yù)冷試劑二，冰浴勻漿10000g 4℃離心10min，取上清液置冰上待測(cè)若活性過(guò)高，可用試劑二稀釋1-10倍后測(cè)定
細(xì)胞/細(xì)菌樣本收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞/細(xì)菌，8000g 4℃離心5min棄上清按照細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量(10?個(gè)):試劑二體積(mL)=500~1000:1的比例加入試劑二（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑二）冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）10000g 4℃離心10min，取上清液置冰上待測(cè)
植物提取物/食品樣本取干燥植物粉末/食品約0.05g，加入1mL試劑二，40℃水浴浸提30min10000rpm室溫離心10min，取上清液置冰上待測(cè)液體樣本（如紅酒、果汁）取100μL加入900μL試劑二，振蕩混勻后離心取上清
測(cè)定操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)曲線建立將100μmol/L Trolox標(biāo)準(zhǔn)品用試劑二稀釋成0、10、20、40、60、80、100μmol/L系列濃度取比色管/96孔板，加入標(biāo)準(zhǔn)品溶液20μL + 試劑一380μL，充分混勻室溫避光反應(yīng)20min，515nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度以Trolox濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
樣本測(cè)定（微量法）分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到51px，蒸餾水調(diào)零取96孔板，設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔空白孔：加入試劑二20μL + 試劑一380μL樣本孔：加入樣本20μL + 試劑一380μL充分混勻，室溫避光反應(yīng)20min，515nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（A空白、A樣）若A樣小于0.2，需用試劑二稀釋樣本后重新測(cè)定
樣本測(cè)定（常規(guī)法）取比色管，分別加入樣本0.5mL + 試劑一0.5mL，混勻室溫避光反應(yīng)30min，515nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（A樣）空白管：加入試劑二0.5mL + 試劑一0.5mL，同樣處理（A空白）
結(jié)果計(jì)算方法
單位定義
μmol Trolox/mL：每毫升樣本清除DPPH自由基的能力相當(dāng)于同摩爾濃度的Trolox
μmol Trolox/g 鮮重：每克組織鮮重清除DPPH自由基的能力
清除率%：樣本清除DPPH自由基的百分比
計(jì)算公式
自由基清除率： DPPH自由基清除率(%)=A空白?A樣A空白×100%DPPH自由基清除率(%)=A空白A空白?A樣×100%
以Trolox當(dāng)量表示的總抗氧化能力： 總抗氧化能力(μmol Trolox/mL)=A空白?A樣ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn)×D總抗氧化能力(μmol Trolox/mL)=ΔA標(biāo)準(zhǔn)A空白?A樣×C標(biāo)準(zhǔn)×D
ΔA標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)品吸光度變化值
C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/mL）
D：樣本稀釋倍數(shù)（未稀釋則為1）按組織鮮重計(jì)算： 總抗氧化能力(μmol Trolox/g鮮重)=總抗氧化能力(μmol Trolox/mL)×V總W總抗氧化能力(μmol Trolox/g鮮重)=W總抗氧化能力(μmol Trolox/mL)×V總
V總：樣本提取液總體積（mL）
W：組織鮮重（g）
性能指標(biāo)
指標(biāo) 要求
線性范圍 0~100μmol Trolox/mL，線性相關(guān)系數(shù)r≥0.995
最低檢測(cè)限 ≤1μmol Trolox/mL
回收率 90%~110%
批內(nèi)精密度 CV≤5.0%
批間精密度 CV≤8.0%
穩(wěn)定性 2-8℃保存12個(gè)月，活性保留≥90%
注意事項(xiàng)
樣本處理：
樣本需新鮮制備，避免長(zhǎng)時(shí)間放置導(dǎo)致抗氧化物質(zhì)降解；-80℃可保存1個(gè)月
勻漿與超聲破碎需在冰浴中進(jìn)行，控制溫度在0-4℃
樣本需避免氧化，處理過(guò)程中盡量減少與空氣接觸
試劑使用：
DPPH溶液對(duì)光敏感，配制后需避光保存，且易揮發(fā)，反應(yīng)時(shí)建議密封
標(biāo)準(zhǔn)品需現(xiàn)配現(xiàn)用，避免降解
不同批號(hào)試劑不能混用，需重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
測(cè)定過(guò)程：
反應(yīng)需在室溫避光條件下進(jìn)行，避免光照和溫度影響
若吸光度值變化過(guò)大，需稀釋樣本后重新測(cè)定
有色樣本需設(shè)立對(duì)照管，以消除樣本本身顏色的干擾
質(zhì)量控制：
每次實(shí)驗(yàn)需設(shè)置空白對(duì)照和質(zhì)控樣本
定期校準(zhǔn)儀器，確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性
若結(jié)果偏差較大，需檢查試劑是否變質(zhì)或樣本處理是否正確
公司正在出售的產(chǎn)品
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