脂蛋白酯酶（LPL）測試盒

測定意義與原理

測定意義

脂蛋白酯酶（LPL）是一種關鍵的甘油三酯水解酶，主要由脂肪組織、骨骼肌和心肌細胞合成，能水解乳糜微粒和極低密度脂蛋白中的甘油三酯，釋放出游離脂肪酸和甘油供組織利用。其活性檢測具有重要意義：臨床診斷：診斷和監(jiān)測高脂蛋白血癥、冠心病、糖尿病、肥胖癥等疾病監(jiān)測：評估脂質(zhì)代謝狀態(tài)、組織損傷程度和治療效果生物學研究：了解脂質(zhì)代謝途徑、細胞信號傳導和能量代謝機制藥物研發(fā)：篩選降脂藥物，用于治療高血脂、脂肪肝等疾病

測定原理

比色法：脂蛋白酯酶催化水解甘油三酯產(chǎn)生甘油和脂肪酸，甘油在甘油激酶作用下生成3-磷酸甘油，再經(jīng)磷酸甘油氧化酶作用生成磷酸二羥丙酮和過氧化氫，過氧化氫與4-氨基安替比林及4-氯酚在過氧化物酶作用下生成紅色醌類化合物，在500nm處有特征吸收峰。反應式如下： 甘油三酯+3H2O→LPL甘油+3脂肪酸甘油三酯+3H2OLPL甘油+3脂肪酸 甘油+ATP→甘油激酶3-磷酸甘油+ADP甘油+ATP甘油激酶3-磷酸甘油+ADP 3-磷酸甘油+O2→磷酸甘油氧化酶磷酸二羥丙酮+H2O23-磷酸甘油+O2磷酸甘油氧化酶磷酸二羥丙酮+H2O2 H2O2+4-氨基安替比林+4-氯酚→過氧化物酶紅色醌類化合物H2O2+4-氨基安替比林+4-氯酚過氧化物酶紅色醌類化合物

ELISA法：采用雙抗體夾心法，將LPL與特異性抗體結合，通過酶標二抗檢測結合的LPL，根據(jù)吸光度值計算LPL含量。

試劑盒組成

比色法試劑盒

組分 規(guī)格 作用說明

試劑一 液體50mL×1瓶 反應緩沖液，含甘油激酶、磷酸甘油氧化酶、4-氨基安替比林等

試劑二 液體10mL×1瓶 含4-氯酚、過氧化物酶

試劑三 粉劑×1支 含底物，需用3mL 異丙醇溶解

標準品 液體1mL×1支 含甘油三酯標準液，濃度為10mmol/L

ELISA法試劑盒

組分 規(guī)格 作用說明

包被板 96孔×1塊 預包被抗LPL單克隆抗體

酶標抗體 液體6mL×1瓶 含HRP標記抗LPL抗體

標準品 液體1mL×6管 含0.1-10ng/mL LPL標準品

樣本稀釋液 10mL×1瓶 用于稀釋樣本和標準品

顯色劑A液 6mL×1瓶 含過氧化氫溶液

顯色劑B液 6mL×1瓶 含TMB溶液

終止液 6mL×1瓶 含硫酸溶液

20倍濃縮洗滌液 20mL×1瓶 用于洗滌酶標板

自備儀器與試劑

必備儀器

比色法：可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、恒溫水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿/96孔板、研缽、電子天平

ELISA法：酶標儀（450nm檢測通道）、96孔板、37℃恒溫箱、洗板機、可調(diào)式移液器、臺式離心機

必備耗材

離心管（1.5mL/10mL）、一次性吸頭、研缽/組織勻漿器、超聲破碎儀

自備試劑：蒸餾水/去離子水、生理鹽水

樣本前處理方法

血清/血漿樣本采集：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20°C，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍

組織樣本取樣：按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿離心：8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測

細胞/微生物樣本收集：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清破碎：按照細菌或細胞數(shù)量（10?個）:提取液體積(mL)為500~1000:1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20%或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）離心：8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測

測定操作步驟

比色法操作儀器預熱：可見分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長到500nm，蒸餾水調(diào)零試劑配制：

試劑三：臨用前加入3mL異丙醇充分溶解備用樣本測定：

試劑名稱(μL) 空白管 測定管

蒸餾水/樣本 20 20

試劑一 700 700

試劑二 100 100

試劑三 180 180

混勻后37℃水浴15min，記錄500nm處的吸光值A空白和A測定標準曲線繪制：將LPL標準品稀釋成0、0.031、0.063、0.125、0.25、0.5、1μmol/L系列濃度，同樣處理，測定500nm處的吸光值，繪制標準曲線

ELISA法操作試劑準備：將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出，室溫平衡15-30分鐘；將20×洗滌緩沖液用蒸餾水20倍稀釋后備用加樣：

從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃

設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加溫育：除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入HRP標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min洗滌：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）顯色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min終止：每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值結果計算：繪制標準曲線，按曲線方程計算樣本濃度

結果計算方法

單位定義

U/L：每升樣本每分鐘催化水解1μmol甘油三酯的酶量

ng/mL：每毫升樣本中LPL的含量

比色法計算公式

LPL活性(U/L)=樣本OD值?空白OD值標準品OD值?空白OD值×標準品濃度×稀釋倍數(shù)×V總V樣×1T×1000LPL活性(U/L)=標準品OD值?空白OD值樣本OD值?空白OD值×標準品濃度×稀釋倍數(shù)×V樣V總×T1×1000

V總：反應體系總體積（mL）

V樣：樣本體積（mL）

T：反應時間（min）

ELISA法計算公式

LPL含量(ng/mL)=樣本OD值?空白OD值標準品OD值?空白OD值×標準品濃度×稀釋倍數(shù)LPL含量(ng/mL)=標準品OD值?空白OD值樣本OD值?空白OD值×標準品濃度×稀釋倍數(shù)

性能指標

指標 比色法 ELISA法

線性范圍 0~1U/L 0.1-10ng/mL

最低檢測限 ≤0.031U/L ≤0.05ng/mL

回收率 90%~110% 90%~110%

批內(nèi)精密度 CV≤2.2% CV≤3.8%

批間精密度 CV≤5.0% CV≤8.5%

穩(wěn)定性 2-8℃保存6-12個月 2-8℃保存6-12個月

注意事項

樣本處理：

樣本需新鮮制備，避免LPL失活；-20℃可保存3個月

組織樣本需冰浴勻漿，避免酶失活

液體樣本需避免溶血和細菌污染

試劑使用：

試劑需臨用前配制，避免氧化失效

不同批號試劑不能混用，需重新繪制標準曲線

標準品需4℃保存，避免反復凍融

測定過程：

反應溫度需嚴格控制在37℃

加入樣品啟動反應后3秒內(nèi)即刻比色測定

若吸光度值超出線性范圍，需稀釋樣本后重新測定

質(zhì)量控制：

每次實驗需設置空白對照和質(zhì)控樣本

定期校準儀器，確保檢測結果準確性

若結果偏差較大，需檢查試劑是否變質(zhì)或樣本處理是否正確

公司正在出售的產(chǎn)品