人骨骼肌細(xì)胞

產(chǎn)品信息：

產(chǎn)品名稱 人骨骼肌細(xì)胞

組織來(lái)源 骨骼肌組織
種屬 人

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

培養(yǎng)信息：

方法簡(jiǎn)介：實(shí)驗(yàn)室分離的人骨骼肌細(xì)胞采用膠原酶消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)：實(shí)驗(yàn)室分離的人骨骼肌細(xì)胞經(jīng)α-Sarcomeric actin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品名稱：人骨骼肌細(xì)胞

組織來(lái)源：骨骼肌組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)信息：包被條件PLL(0.1mg/ml)

培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率:每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%胰蛋白酶人骨骼肌細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞簡(jiǎn)介 ：

人骨骼肌細(xì)胞分離自四肢肌肉組織；骨骼肌又稱橫紋肌，肌肉中的一種，約占全身重量的40%。骨骼肌纖維為長(zhǎng)柱形的多核細(xì)胞，肌膜的外面有基膜緊密貼附。屬于橫紋肌，橫紋肌還包括心肌與內(nèi)臟橫紋肌，其中骨骼肌主要分布于四肢。每塊肌肉都是具有一定形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能的器官，有豐富的血管、淋巴分布，在軀體神經(jīng)支配下收縮或舒張，進(jìn)行隨意運(yùn)動(dòng)。肌肉可根據(jù)共形狀、大小、位置、起止點(diǎn)、纖維方向和作用等命名。依形態(tài)命名的如斜方肌、菱形肌、三角肌、梨狀肌等。骨骼肌細(xì)胞呈纖維狀，不分支，有明顯橫紋，核很多，且都位于細(xì)胞膜下方。肌細(xì)胞內(nèi)有許多沿細(xì)胞長(zhǎng)軸平行排列的細(xì)絲狀肌原纖維。每一肌原纖維都有相間排列的明帶(Ⅰ帶)及暗帶(A帶)。明帶染色較淺，而暗帶染色較深。暗帶中間有一條較明亮的線稱H線。H線的中部有一M線。明帶中間，有一條較暗的線稱為Z線。兩個(gè)Z線之間的區(qū)段，叫做一個(gè)肌節(jié)。骨骼肌細(xì)胞也稱橫紋肌細(xì)胞，細(xì)胞呈纖維狀，不分支，有明顯橫紋，核很多，且都位于細(xì)胞膜下方，細(xì)胞多呈梭行，具有一定的方向性。骨骼肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)：大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。
原代細(xì)胞傳代：

傳代時(shí)機(jī)判斷

細(xì)胞匯合度達(dá)到80%-90%時(shí)進(jìn)行傳代，避免細(xì)胞過度匯合導(dǎo)致接觸抑制，影響增殖能力

觀察細(xì)胞狀態(tài)：細(xì)胞形態(tài)正常，無(wú)明顯漂浮、污染跡象

消化環(huán)節(jié)控制

消化前準(zhǔn)備：吸出舊培養(yǎng)基，用PBS輕輕沖洗細(xì)胞1-2次，去除血清（血清會(huì)抑制胰蛋白酶活性）

消化液選擇：同原代分離，根據(jù)細(xì)胞類型選擇合適的消化酶，胰蛋白酶消化時(shí)間一般為1-5分鐘，膠原酶消化時(shí)間為10-30分鐘

消化終止：顯微鏡下觀察到細(xì)胞回縮變圓、間隙增大時(shí)，立即加入含血清的培養(yǎng)基終止消化，血清濃度不低于10%

細(xì)胞吹打：用移液器輕輕吹打細(xì)胞，避免過度用力導(dǎo)致細(xì)胞破裂，吹打次數(shù)一般為10-15次

傳代比例控制

傳代比例根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)速度調(diào)整：生長(zhǎng)速度快的細(xì)胞（如成纖維細(xì)胞）可按1:3-1:6傳代，生長(zhǎng)速度慢的細(xì)胞（如內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞）按1:2傳代

首次傳代比例可適當(dāng)提高（如1:2），待細(xì)胞適應(yīng)體外培養(yǎng)環(huán)境后再調(diào)整為常規(guī)比例

傳代后培養(yǎng)

接種后輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞均勻分布，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

24小時(shí)內(nèi)不要晃動(dòng)培養(yǎng)瓶，避免細(xì)胞貼壁不牢

培養(yǎng)24-48小時(shí)后觀察細(xì)胞貼壁情況，更換新鮮培養(yǎng)基，去除未貼壁的死細(xì)胞和細(xì)胞碎片
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細(xì)胞分離與接種：

酶消化的“度”：酶液濃度和消化時(shí)間需精準(zhǔn)控制，如胰蛋白酶濃度通常為0.25%，消化時(shí)間5-15分鐘（根據(jù)組織類型調(diào)整），消化期間每隔3-5分鐘輕輕晃動(dòng)容器，鏡下觀察到細(xì)胞變圓、間隙增大時(shí)，立即加入含血清的培養(yǎng)基終止消化。

吹打力度適中：用巴氏吸管吹打細(xì)胞懸液時(shí)，避免用力過猛產(chǎn)生大量氣泡，以吹打后細(xì)胞懸液呈均勻霧狀為宜，一般吹打10-15次即可，過度吹打會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞膜破裂。

接種密度適配：根據(jù)細(xì)胞增殖速度調(diào)整接種密度，增殖快的細(xì)胞（如成纖維細(xì)胞）可適當(dāng)降低密度，增殖慢的細(xì)胞（如神經(jīng)元）需提高接種密度，確保細(xì)胞能相互支持生長(zhǎng)。