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無(wú)酶消化液

品牌：MedChemExpress (MCE)

貨號(hào)：HY-K6020

產(chǎn)品活性：MCE iPSC/ESC 無(wú)酶消化液是一款基于化學(xué)螯合機(jī)制開(kāi)發(fā)的、專(zhuān)用于誘導(dǎo)多能干細(xì)胞 (iPSC) 和胚胎干細(xì)胞 (ESC) 培養(yǎng)操作的無(wú)酶細(xì)胞解離試劑?？稍?5-8 min 內(nèi)高效完成 iPSC/ESC 的溫和消化，適用于常規(guī)傳代、消化及細(xì)胞團(tuán)塊處理等操作，穩(wěn)定性和細(xì)胞狀態(tài)保持效果顯著優(yōu)于傳統(tǒng)方案。

描述及優(yōu)勢(shì)：MCE iPSC/ESC 無(wú)酶消化液是一款基于化學(xué)螯合機(jī)制開(kāi)發(fā)的、專(zhuān)用于誘導(dǎo)多能干細(xì)胞 (iPSC) 和胚胎干細(xì)胞 (ESC) 培養(yǎng)操作的無(wú)酶細(xì)胞解離試劑。其核心作用機(jī)理是利用乙二酸類(lèi)螯合劑溫和破壞細(xì)胞間隙連接，從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞團(tuán)塊的有效分離。 本產(chǎn)品添加了碳酸氫鹽、葡萄糖和 HEPES 等成分構(gòu)建穩(wěn)定的緩沖體系，維持適宜的 pH 環(huán)境；同時(shí)含有氯化鉀、氯化鈉等電解質(zhì)以調(diào)節(jié)滲透壓，使整體體系更接近胚胎微環(huán)境的生理?xiàng)l件。 本品可在 5-8 min 內(nèi)高效完成 iPSC/ESC 的溫和消化，適用于常規(guī)傳代、消化及細(xì)胞團(tuán)塊處理等操作，穩(wěn)定性和細(xì)胞狀態(tài)保持效果顯著優(yōu)于傳統(tǒng)方案。

操作流程：1. PSC 傳代時(shí)機(jī) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到約 85% 時(shí)即可進(jìn)行傳代，常規(guī)情況下每 4-8 d 傳代一次。若細(xì)胞密度較低或分布不均勻，應(yīng)根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)綜合評(píng)估是否適合傳代。 注：即使克隆團(tuán)較小或匯合度不足，也不建議連續(xù)培養(yǎng)超過(guò) 10 d。 2. 傳代比例調(diào)整 根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)和實(shí)驗(yàn)需求，按照 1:6-1:12 的比例進(jìn)行傳代。當(dāng)細(xì)胞狀態(tài)良好、克隆團(tuán)大小均勻且匯合度約 85% 時(shí)，建議采用 1:12 傳代。 注：”1:12” 表示將一個(gè)孔/瓶細(xì)胞分至 12 個(gè)孔 (以 6 孔板為例)。 3. 孔板準(zhǔn)備 將預(yù)先以干細(xì)胞基底膜基質(zhì)膠 (Cat. No.: HY-K6006) 包被的 6 孔板置于 37°C 培養(yǎng)箱孵育 1 h。 4. 培養(yǎng)基準(zhǔn)備 根據(jù)接種孔數(shù)準(zhǔn)備每孔 2 mL 的干細(xì)胞完全培養(yǎng)基。將 CEPT Cocktail Plus (1000×) (Cat. No.: HY-K6021) 按 1:1000 的比例加入到干細(xì)胞培養(yǎng)基 (Cat. No.: HY-K6501) 中，充分混勻配制干細(xì)胞完全培養(yǎng)基。使用前使其恢復(fù)至室溫 (25°C)。 5. 細(xì)胞清洗 吸棄培養(yǎng)基上清，向每孔加入 2 mL DPBS (無(wú)鈣鎂, Cat. No.: HY-K3008)，輕柔混勻清洗細(xì)胞，再吸棄清洗液。 6. 細(xì)胞消化 每孔加入 2 mL 干細(xì)胞消化液 (Cat. No.: HY-K6020)，使其完全覆蓋孔底。置于 37°C 培養(yǎng)箱中消化 5-7 min。 注：a. 建議消化 5 min 后鏡下觀察，若大部分細(xì)胞變圓變亮但未完全脫離基質(zhì)，即可終止消化；若未見(jiàn)明顯變化，可適當(dāng)延長(zhǎng)時(shí)間。 b. 為確保受熱均勻，應(yīng)使培養(yǎng)板與培養(yǎng)箱金屬隔板直接接觸，避免疊放。 7. 終止消化 消化完成后取出培養(yǎng)板，吸棄消化液。 8. 回收細(xì)胞 每孔加入 1-2 mL 預(yù)熱的干細(xì)胞完全培養(yǎng)基，輕柔吹打 3 次，并以水平“十字法”輕搖混勻使細(xì)胞團(tuán)塊脫落。 注：a. 少量 (10-15%) 殘留細(xì)胞未脫離基質(zhì)屬正?，F(xiàn)象。 b. 為提高接種均勻性并減少機(jī)械損傷，建議將回收的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至 1.5 mL 離心管中。 9. 處理預(yù)包被孔板 吸棄 6 孔板中的溶液，每孔加入 2 mL干細(xì)胞完全培養(yǎng)基。 10. 細(xì)胞接種 在孔板上標(biāo)注細(xì)胞名稱(chēng)、代次、傳代比例及日期。將消化后的細(xì)胞懸液輕柔混勻后按預(yù)設(shè)的傳代比例均勻分配至各孔。 11. 鋪板與培養(yǎng) 接種后以水平“十字法”輕搖混勻培養(yǎng)板 3 次，置于培養(yǎng)箱中過(guò)夜培養(yǎng)。 12. 換液 接種后 18-24 h 換液，隨后每天換液一次。 13. 后續(xù)培養(yǎng) 傳代 4-8 d 后根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)進(jìn)行下一輪傳代或凍存。

詳情參考：https://www.medchemexpress.cn/inhibitor-kit/ipsc-esc-dissociation-solution-enzyme-free.html