基本信息?
產(chǎn)品名稱 | 胰酶細(xì)胞消化液 | 貨號(hào) | P-PR1409 |
規(guī)格 | 100ml | 用途 | 僅供科研 |
?英文名稱?：Trypsin Cell Digestion Solution
作用機(jī)制：含有胰蛋白酶與EDTA，可分解細(xì)胞間的蛋白質(zhì)連接，使貼壁細(xì)胞從培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板上脫落；EDTA可螯合細(xì)胞外的鈣離子，增強(qiáng)胰蛋白酶的消化效果；常用于細(xì)胞傳代、細(xì)胞收集等實(shí)驗(yàn)。
適用樣本：貼壁細(xì)胞的消化與傳代，適用于動(dòng)物細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞等的培養(yǎng)與傳代。
產(chǎn)品概述
胰酶細(xì)胞消化液是一種用于細(xì)胞培養(yǎng)的消化試劑，主要成分是胰蛋白酶，還含有EDTA等輔助成分，用于貼壁細(xì)胞的消化傳代。胰蛋白酶是一種絲氨酸蛋白酶，能夠特異性地水解細(xì)胞與細(xì)胞之間、細(xì)胞與培養(yǎng)底物之間的蛋白質(zhì)連接，使貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞從培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板表面脫落下來(lái)，形成單細(xì)胞懸液，便于細(xì)胞的傳代培養(yǎng)、計(jì)數(shù)、接種等操作。EDTA（乙二胺四乙酸）能夠螯合細(xì)胞表面的鈣離子，增強(qiáng)胰蛋白酶的消化作用。胰酶細(xì)胞消化液通常為無(wú)血清或低血清配方，避免了血清對(duì)胰蛋白酶活性的抑制。使用時(shí)，將消化液加入到培養(yǎng)容器中，孵育一定時(shí)間后，通過(guò)輕輕搖晃培養(yǎng)容器使細(xì)胞脫落，然后加入含血清的培養(yǎng)基終止消化反應(yīng)。胰酶細(xì)胞消化液是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室中常用的試劑，為貼壁細(xì)胞的常規(guī)培養(yǎng)與實(shí)驗(yàn)操作提供了必要的工具。
產(chǎn)品特點(diǎn)
消化效率高：胰蛋白酶和EDTA協(xié)同作用，快速消化貼壁細(xì)胞，使細(xì)胞完全脫落。
細(xì)胞損傷?。翰捎玫蜐舛扰浞?，溫和消化細(xì)胞，保持細(xì)胞活性和完整性。
無(wú)血清配方：不含血清，避免了血清對(duì)胰蛋白酶活性的抑制，消化效果更穩(wěn)定。
使用方便：直接加入培養(yǎng)瓶即可，無(wú)需提前處理，實(shí)驗(yàn)流程簡(jiǎn)便。
適用性廣：適合大多數(shù)貼壁細(xì)胞系的消化傳代，包括腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞等。
操作步驟
樣本處理：向1.5ml EP管中加入600μl miRNA提取試劑，再加入500μl血清或血漿樣本，漩渦振蕩30秒充分混勻
初步分離：13000rpm離心5分鐘，將上清約1ml轉(zhuǎn)移至新的2ml EP管中，加入1ml異丙醇，上下顛倒混合均勻
柱式吸附：將混合液分三次加入吸附柱（每次約700μl），13000rpm離心15秒，倒掉過(guò)柱液
洗滌純化：
向吸附柱中加入700μl 75%異丙醇，13000rpm離心15秒，倒掉過(guò)濾液
向吸附柱中加入500μl無(wú)水乙醇，13000rpm離心15秒，倒掉過(guò)濾液
干燥柱體：吸附柱13000rpm空離心2分鐘，去除殘留乙醇，室溫放置2分鐘使乙醇完全揮發(fā)
RNA洗脫：在吸附柱濾芯中央加入30μl RNase-Free TE緩沖液，室溫靜置2分鐘，13000rpm離心2分鐘，收集濾液即為提取的miRNA產(chǎn)物
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注意事項(xiàng)
樣本處理：
血漿抗凝劑建議使用EDTA或檸檬酸鈉，避免使用肝素（會(huì)抑制PCR檢測(cè)）
樣本應(yīng)避免反復(fù)凍融，新鮮樣本建議盡快處理
試劑使用：
miRNA提取試劑含有胍鹽，具有強(qiáng)烈腐蝕性，操作時(shí)需佩戴防護(hù)眼鏡、手套和口罩
自備試劑需確保無(wú)RNase污染，避免影響RNA完整性
實(shí)驗(yàn)操作：
所有操作需在無(wú)RNase環(huán)境中進(jìn)行，使用RNase-Free的槍頭和離心管
離心過(guò)程需確保離心管蓋緊，避免液體滲漏
產(chǎn)物檢測(cè)：
由于血清/血漿中miRNA含量極低，提取產(chǎn)物濃度通常在5ng/μl以下，難以用常規(guī)NanoDrop測(cè)量，建議直接取10μl進(jìn)行下游反轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)
為獲得更可靠數(shù)據(jù)，推薦使用特異性和靈敏度更好的TaqMan探針?lè)ㄟM(jìn)行miRNA定量檢測(cè)
產(chǎn)物保存：提取的miRNA產(chǎn)物可立即用于下游實(shí)驗(yàn)，或分裝后置于-80℃長(zhǎng)期保存，避免反復(fù)凍融
關(guān)鍵字： 胰酶細(xì)胞消化液;Trypsin Cell Digesti;
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