小鼠胰腺星狀細(xì)胞

細(xì)胞簡(jiǎn)介 ：

小鼠胰腺星狀分離自胰腺組織；胰腺分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺兩部分。外分泌腺由腺泡和腺管組成，腺泡分泌胰液，腺管是胰液排出的通道。胰液中含有、原、脂肪酶、等。胰液通過胰腺管排入十二指腸，有消化蛋白質(zhì)、脂肪和糖的作用。內(nèi)分泌腺由大小不同的細(xì)胞團(tuán)──胰島所組成，胰島主要由4種細(xì)胞組成：α細(xì)胞、β細(xì)胞、γ細(xì)胞及PP細(xì)胞。α細(xì)胞分泌胰高血糖素，升高血糖；β細(xì)胞分泌胰島素，降低血糖；γ細(xì)胞分泌，以旁分泌的方式抑制α、β細(xì)胞的分泌；PP細(xì)胞分泌胰多肽，抑制胃腸運(yùn)動(dòng)、胰液分泌和膽囊收縮。纖維化是慢性胰腺炎的典型病理特征，活化的胰腺星狀細(xì)胞（PSC）是胰腺纖維化的主要效應(yīng)細(xì)胞，PSC分離和成功培養(yǎng)是體外研究胰腺纖維化的重要前提。未活性化的PSC胞漿中富含維A脂滴，并表達(dá)Desmin蛋白，活化后的PSC則表達(dá)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（alpha-SMA）。PSC具有靜息態(tài)與激活態(tài)兩種，并分別具有特異的標(biāo)志物。靜息狀態(tài)PSC胞質(zhì)內(nèi)富含的脂滴可以被油紅O染成紅色，陽性表達(dá)Desmin。激活狀態(tài)PSC陽性表達(dá)alpha-SMA。油紅O染色發(fā)現(xiàn)，原代分離的細(xì)胞培養(yǎng)6d，胞漿中仍可見明顯的脂滴，傳代后，橙紅色的脂滴顆粒顯著減少甚至消失。免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示，細(xì)胞接種24h仍然表達(dá)Desmin，48h后Desmin基本不再表達(dá)。培養(yǎng)48h后絕大多數(shù)細(xì)胞開始表達(dá)alpha-SMA，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增長(zhǎng)和傳代次數(shù)的增加，細(xì)胞表達(dá)alpha-SMA，而不再表達(dá)Desmin，說明細(xì)胞活化。提示PSC接種24h后即啟動(dòng)了激活過程，至培養(yǎng)第6d大多數(shù)細(xì)胞激活，傳代后細(xì)胞處于高度激活狀態(tài)。原代胰腺星狀細(xì)胞可作為慢性胰腺炎新藥的細(xì)胞篩選模型，目前研究發(fā)現(xiàn)：胰腺受損時(shí)，在各種刺激因子作用下使胰腺星狀細(xì)胞活化，導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)、功能發(fā)生變化，促使基質(zhì)增生、膠原蛋白的大量生成及不規(guī)則沉積。

 產(chǎn)品信息：

產(chǎn)品名稱 小鼠胰腺星狀細(xì)胞

英文名稱 Mouse Pancreatic Stellate Cells

組織來源 胰腺組織

默認(rèn)種屬 小鼠

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳3-5代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

小鼠胰腺星狀細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

方法簡(jiǎn)介 公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胰腺星狀采用膠原酶制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè) 公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胰腺星狀經(jīng)α-SMA、Desmin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)操作方法：

核心特點(diǎn)

高度生理相關(guān)性：保留了體內(nèi)來源組織的結(jié)構(gòu)、功能和基因表達(dá)特征。

有限壽命：與無限增殖的腫瘤細(xì)胞系不同，原代細(xì)胞增殖能力有限，經(jīng)過一定次數(shù)的分裂后會(huì)進(jìn)入衰老期，這更符合正常細(xì)胞的生理狀態(tài)。

異質(zhì)性：初始培養(yǎng)物通常是多種細(xì)胞類型的混合物，有時(shí)需要通過差速貼壁等方法進(jìn)行純化。

操作要求高：對(duì)培養(yǎng)環(huán)境、試劑質(zhì)量和無菌操作的要求極為嚴(yán)格，培養(yǎng)難度大于永生化細(xì)胞系。

組織塊培養(yǎng)法

取材與剪切

在無菌條件下取出組織，用Hanks液或PBS清洗，去除血污和脂肪、結(jié)締組織等非目標(biāo)成分。

用眼科剪將組織剪切成 0.5-1 mm3 的小塊。

接種

用吸管將組織塊均勻地貼附在培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶的內(nèi)表面，各組織塊之間保持一定間距（約0.5 cm）。

吸去多余液體，將培養(yǎng)器皿翻轉(zhuǎn)，放入 37℃、5% CO的培養(yǎng)箱中，靜置 1-3小時(shí)，讓組織塊牢固貼壁。

加液培養(yǎng)

待組織塊貼壁后，輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，從一側(cè)緩慢加入足量的培養(yǎng)液，使組織塊浸沒在液體中，注意不要讓液體直接沖擊組織塊，以免沖起。

繼續(xù)在培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。通常 3-5天 后可觀察到細(xì)胞從組織塊邊緣長(zhǎng)出。

公司正在出售的產(chǎn)品：

成功的原代培養(yǎng)依賴于嚴(yán)謹(jǐn)?shù)募?xì)節(jié)控制：

嚴(yán)格無菌操作：這是實(shí)驗(yàn)成功的基石。所有操作需在生物安全柜中進(jìn)行，試劑和耗材必須無菌。

保持靜置：細(xì)胞接種后的最初24-48小時(shí)內(nèi)，應(yīng)保持培養(yǎng)瓶絕對(duì)靜置，避免頻繁取出觀察或晃動(dòng)，這有助于細(xì)胞貼壁和伸展。

優(yōu)化消化過程：

消化時(shí)間要恰到好處，過長(zhǎng)會(huì)損傷細(xì)胞，過短則細(xì)胞分散不佳。

膠原酶對(duì)組織的損傷較小，常用于分離活性要求高的細(xì)胞；胰蛋白酶作用較強(qiáng)，需嚴(yán)格控制時(shí)間。

酶液應(yīng)新鮮配制，避免活性下降。

控制接種密度：原代細(xì)胞在低密度下不易存活，建議適當(dāng)提高初始接種密度，以保證細(xì)胞間的相互作用促進(jìn)其生長(zhǎng)。

定期換液：根據(jù)培養(yǎng)基顏色變化（如變黃）或每隔2-3天更換一次培養(yǎng)液，以清除代謝廢物并補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)。