產(chǎn)品用途
本試劑盒用于羅氏沼蝦諾達(dá)病毒RNA的定性及定量檢測。該病毒是“白尾病”的主要病原體，可導(dǎo)致蝦苗死亡率達(dá)80%-100%，我國將其列為二類動物疫病。
適用范圍：科研用途（不可用于臨床診斷）。
檢驗原理
技術(shù)原理：基于實時熒光定量RT-PCR技術(shù)，針對MrNV基因保守區(qū)域設(shè)計特異性引物，通過熒光染料（如SYBR Green）與雙鏈DNA結(jié)合產(chǎn)生信號，實現(xiàn)RNA的擴(kuò)增與定量檢測。
定量方法：采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線法，無需內(nèi)標(biāo)，通過系列稀釋陽性對照建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算待測樣本中病毒RNA拷貝數(shù)。
產(chǎn)品名稱 | 羅氏沼蝦諾達(dá)病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 英文名稱 | Macrobrachium rosenbergii Nodavirus (MrNV) Dye-based qRT-PCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR4364 |
核心優(yōu)勢
高靈敏度：最低檢出限為1×103 copies/mL，顯著優(yōu)于傳統(tǒng)培養(yǎng)法。
強(qiáng)特異性：引物設(shè)計經(jīng)生物信息學(xué)驗證，避免與其他病原體交叉反應(yīng)。
快速高效：全程檢測時間約1-2小時（含RNA提取），兼容自動化核酸提取設(shè)備。
試劑組成
| 名稱 | 規(guī)格 |
| 5×雙酶一管式RT-PCR Buffer | 200 μL×1管 |
| MMLV-Taq Mix | 75 μL×1管 |
| 超純水 | 1 mL×1管 |
| MrNV特異性引物混合液 | 100 μL×1管 |
| 陽性對照（1×10? copies/μL） | 50 μL×1管 |
| 核酸釋放劑 | 1 mL×1管（20次用量） |
| 使用手冊 | 1份 |
注：陽性對照為人工合成的DNA片段，不含活病毒。
操作流程
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備
標(biāo)記6支離心管（7-2號），每管加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液。
在7號管中加入5 μL陽性對照（1×10? copies/μL），震蕩混勻后得1×10? copies/μL標(biāo)準(zhǔn)品。
依次梯度稀釋至2號管，獲得6個濃度標(biāo)準(zhǔn)品（1×10?~1×102 copies/μL），冰上保存?zhèn)溆谩?/span>
樣本RNA提取
樣本類型：蝦組織（親蝦、蝦苗）、餌料、水產(chǎn)品等。
提取方法：推薦使用商業(yè)化病毒RNA提取試劑盒（如QIAGEN、Roche），操作需在生物安全柜內(nèi)完成。
熒光定量PCR反應(yīng)
反應(yīng)體系（以25 μL為例）：
5×RT-PCR Buffer 5 μL
MMLV-Taq Mix 1 μL
引物混合液 1 μL
模板RNA 5 μL
超純水補(bǔ)至25 μL。
擴(kuò)增程序：
逆轉(zhuǎn)錄：50℃ 15分鐘
預(yù)變性：95℃ 3分鐘
擴(kuò)增：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循環(huán)），于60℃采集熒光信號。
結(jié)果分析
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣本中MrNV RNA拷貝數(shù)，Ct值≤35且擴(kuò)增曲線呈S型判為陽性。
注意事項
分區(qū)操作：嚴(yán)格區(qū)分試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)，避免污染。
質(zhì)量控制：每批實驗需包含陰性對照（超純水）和陽性對照。
保存條件：試劑盒-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
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關(guān)鍵字： 羅氏沼蝦諾達(dá)病毒;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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