產(chǎn)品用途

本試劑盒用于羅氏沼蝦諾達病毒RNA的定性及定量檢測。該病毒是“白尾病”的主要病原體，可導致蝦苗死亡率達80%-100%，我國將其列為二類動物疫病。

適用范圍：科研用途（不可用于臨床診斷）。

檢驗原理

技術原理：基于實時熒光定量RT-PCR技術，針對MrNV基因保守區(qū)域設計特異性引物，通過熒光染料（如SYBR Green）與雙鏈DNA結合產(chǎn)生信號，實現(xiàn)RNA的擴增與定量檢測。

定量方法：采用外標準曲線法，無需內標，通過系列稀釋陽性對照建立標準曲線，計算待測樣本中病毒RNA拷貝數(shù)。

核心優(yōu)勢

高靈敏度：最低檢出限為1×103 copies/mL，顯著優(yōu)于傳統(tǒng)培養(yǎng)法。

強特異性：引物設計經(jīng)生物信息學驗證，避免與其他病原體交叉反應。

快速高效：全程檢測時間約1-2小時（含RNA提?。?，兼容自動化核酸提取設備。

試劑組成

| 名稱 | 規(guī)格 |

| 5×雙酶一管式RT-PCR Buffer | 200 μL×1管 |

| MMLV-Taq Mix | 75 μL×1管 |

| 超純水 | 1 mL×1管 |

| MrNV特異性引物混合液 | 100 μL×1管 |

| 陽性對照（1×10? copies/μL） | 50 μL×1管 |

| 核酸釋放劑 | 1 mL×1管（20次用量） |

| 使用手冊 | 1份 |

注：陽性對照為人工合成的DNA片段，不含活病毒。

操作流程

標準曲線制備

標記6支離心管（7-2號），每管加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液。

在7號管中加入5 μL陽性對照（1×10? copies/μL），震蕩混勻后得1×10? copies/μL標準品。

依次梯度稀釋至2號管，獲得6個濃度標準品（1×10?~1×102 copies/μL），冰上保存?zhèn)溆谩?/span>

樣本RNA提取

樣本類型：蝦組織（親蝦、蝦苗）、餌料、水產(chǎn)品等。

提取方法：推薦使用商業(yè)化病毒RNA提取試劑盒（如QIAGEN、Roche），操作需在生物安全柜內完成。

熒光定量PCR反應

反應體系（以25 μL為例）：

5×RT-PCR Buffer 5 μL

MMLV-Taq Mix 1 μL

引物混合液 1 μL

模板RNA 5 μL

超純水補至25 μL。

擴增程序：

逆轉錄：50℃ 15分鐘

預變性：95℃ 3分鐘

擴增：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循環(huán)），于60℃采集熒光信號。

結果分析

根據(jù)標準曲線計算樣本中MrNV RNA拷貝數(shù)，Ct值≤35且擴增曲線呈S型判為陽性。

注意事項

分區(qū)操作：嚴格區(qū)分試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)，避免污染。

質量控制：每批實驗需包含陰性對照（超純水）和陽性對照。

保存條件：試劑盒-20℃避光保存，避免反復凍融。

公司正在出售的產(chǎn)品