創(chuàng)傷弧菌染料法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱
英文名稱
Vibrio vulnificus Dye-based qPCR Kit
規(guī)格
50T
貨號
PR4521
檢測原理
基于實時熒光定量PCR技術,通過特異性引物和熒光探針靶向創(chuàng)傷弧菌的保守基因序列。擴增過程中,探針與目的基因結(jié)合后被Taq酶水解,釋放熒光信號,儀器通過FAM通道檢測熒光強度變化,生成實時擴增曲線,實現(xiàn)定性檢測。
試劑盒組分
預混液(含引物、探針、dNTPs、酶等)
陰性對照
陽性對照
其他必要反應試劑
操作步驟
樣本準備:提取待測樣本DNA。
反應體系配制:
取PCR反應管,每管加入20 μL預混液(使用前渦旋混勻并離心)。
分別加入5 μL陰性對照、待測樣本DNA或陽性對照,總體積25 μL。
PCR擴增程序:
階段1:95℃ 30秒(預變性);
階段2:95℃ 5秒 → 60℃ 30秒(信號采集),共40個循環(huán)。
信號采集:
熒光通道選擇FAM,淬滅基團和染料校正均設為“None”。
結(jié)果判讀
通過儀器軟件自動分析擴增曲線及Ct值,閾值和基線可根據(jù)儀器噪聲調(diào)整。
陽性樣本顯示典型的S型擴增曲線,陰性樣本無擴增信號。
性能參數(shù)
靈敏度:最低檢測限為100 CFU/測試。
特異性:對創(chuàng)傷弧菌目標基因高度特異,無交叉反應。
儲存及穩(wěn)定性
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
有效期:12個月。
注意事項
操作需符合生物安全規(guī)范,避免污染。
試劑解凍后應充分混勻,離心去除氣泡。
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